Методы и приборы анализа крови

Методы и приборы анализа крови

2.1. Техника забора крови и подготовки
образца крови для исследования

Шаг А. Подготовка растворов, пробирок и другого инструментария (табл. 1).

Таблица 1. Необходимые подготовительные процедуры при проведении общего анализа крови

Определяемый показатель Посуда Раствор, его объем и состав
СОЭ Химическая пробирка и капилляр Панченкова 5 %-ный раствор C6H5O7Na3∙5H2O набрать в капилляр Панченкова до метки 0,75 и затем выдуть в химическую пробирку
Гемоглобин Химическая пробирка 4 мл трансформирующего раствора (ацетоциангидрин – 0,5 мг, калий железосинеродистый – 0,2 г, натрия гидрокарбонат – 1 г, дистиллированная вода – до 1 л)
Количество эритроцитов Химическая пробирка 4 мл изотонического раствора хлорида натрия
Количество лейкоцитов Химическая пробирка 0,4 мл 3–5 %-ной уксусной кислоты (уксусная кислота разрушает эритроциты, визуализируя тем самым лейкоциты)
Количество тромбоцитов Химическая пробирка 4 мл 1 %-ного раствора оксалата аммония (раствор разрушает эритроциты, визуализируя тромбоциты)

Забор крови из мякоти пальца (капиллярная кровь).

Тщательно протирают кожу мякоти пальца ватным шариком, смоченным спиртом, делают укол стерильным копьем до упора. Первую выступившую каплю крови вытирают сухим ватным шариком; из следующих капель, выступающих из мест укола при легком надавливании, быстро набирают необходимое количество крови: для СОЭ, для определения гемоглобина, для определения числа эритроцитов, для определения числа лейкоцитов, для исследования лейкоцитарной формулы, для определения тромбоцитов.

Забор крови из вены (венозная кровь).

Накладывают жгут на 8–10 см выше локтевого сгиба. Обрабатывают кожу локтевого сгиба над обнаруженной по характерному вздутию вены шариком, смоченным спиртом или другим антисептиком. В вену вводят иглу с подсоединенным шприцем и набирают необходимое для анализа количество крови. Кровь осторожно (не вспенивая, так как при этом происходит разрушение эритроцитов и других клеток крови) выпускают в пробирку с порошком ЭДТА или другим антикоагулянтом. Пробирку закрывают пробкой и тщательно перемешивают кровь для распределения антикоагулянта, опрокидывая пробирку сначала пробкой вниз, затем пробкой вверх. В настоящее время используются специальные системы для забора крови и ее одновременного помещения в одноразовую пластиковую пробирку с антикоагулянтом. Предпочтение исследования венозной крови связано с возможностью одновременного получения объема крови, необходимого для разных анализов.

Шаг В. Внесение крови в подготовленную лабораторную посуду

Кровь вносят в подготовленную посуду специальным капилляром объемом 20 мкл согласно приведенным в табл. 2 разведениям в указанном выше порядке. Набирают ее капилляром до метки 0,02 из мест укола в мякоти пальца или пробирки с венозной кровью, кончик капилляра промокают фильтровальной бумагой, выдувают кровь в соответствующую пробирку и промывают капилляр (путем заполнения капилляра и выдувания раствора) в реактиве той же пробирки для максимально полного внесения образца крови.

Таблица 2. Объемы крови для определения показателей общего анализа крови

Определяемый показатель Объем диагностического раствора Объем крови
СОЭ 1/4 часть капилляра Панченкова (до отметки 0,75), раствор вносится в химическую пробирку Полный капилляр Панченкова до отметки 0, кровь вносится в химическую пробирку с раствором цитрата калия (соотношение кровь : цитрат = 4 : 1)
Гемоглобин 4 мл 0,02 мл
Количество эритроцитов 4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 200)
Количество лейкоцитов 0,4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 20)
Количество тромбоцитов 4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 200)

Затем для последующего определения лейкоцитарной формулы каплю крови наносят на край обезжиренного предметного стекла и быстро готовят тонкий мазок с помощью шлифованного стекла, краем которого быстрым движением продвигают каплю крови по предметному стеклу.

Таким образом, после выполнения шага В для исследования образца крови имеются 4 пробирки со смесью крови и соответствующего реактива и приготовленный тонкий мазок крови на предметном стекле, необходимые для дальнейших диагностических процедур с использованием специального оборудования (табл. 3).

Таблица 3. Оборудование и методы определения основных показателей общего анализа крови

Определяемый показатель Необходимое оборудование Метод
СОЭ Аппарат Панченкова (штатив и капилляры – 1 на каждый образец крови) Седиментационный с последующим визуальным учетом
Гемоглобин Фотоэлектроколориметр Биохимический с ФЭК-учетом результатов
Количество эритроцитов Камера Горяева, световой микроскоп Микроскопический
Количество лейкоцитов Камера Горяева, световой микроскоп Микроскопический
Количество тромбоцитов Камера горяева, световой микроскоп Микроскопический

2.2. Техника определения показателей
общего анализа крови

источник

Наиболее информативной лабораторной диагностикой состояния организма человека являются анализы крови. Они применяются практически во всех областях медицины при диагностировании многих заболеваний, проведении профилактических осмотров, контроле проводимой терапии. Какие же методы анализа крови используются при этом? Конечно, рассмотреть все существующие методы исследования крови достаточно трудно, так как их существует очень много. Поэтому, рассмотрим методики проведения исследований наиболее часто встречающихся анализов крови.

Общий анализ крови дает возможность врачу оценить общее состояние здоровья человека, определить наличие воспалительного процесса, инфекционных и паразитарных заболеваний, патологий кроветворения в организме. В ходе его проведения определяют много показателей, изменения значений которых могут указывать на те или иные проблемы со здоровьем.

Основным методом общего анализа крови является микроскопическое исследование. В ходе его проведения врач-лаборант производит подсчет клеток крови (лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов) и оценивает их форму. Объект анализа при данном методе – высушенный и окрашенный мазок крови. Микроскопическое исследование имеет большую диагностическую ценность. В то же время, если рассматривать каплю крови, то информационность микроскопии значительно увеличивается. Причиной высушивания мазка, при котором деформируются клетки крови, является содержание кровяными клетками большого количества воды. Вода слабо поглощает свет, в результате чего клетки становятся прозрачными под микроскопом.

Дает возможность увидеть живые кровяные клетки. Метод основан на регистрации разницы изменения фазы проходящих лучей света клетками крови. С помощью метода фазо-контрастной микроскопии можно получить четкое контрастное изображение структуры клеток крови, наблюдать особенности их поведения, выявлять в плазме крови кристаллы многих соединений и живые клетки микроорганизмов. Данный метод анализа крови дает возможность оценить поведение эритроцитов (их подвижность, способность объединяться), рассмотреть процесс агрегации (объединения) тромбоцитов. Кроме того, при таком методе исследования в плазме крови обнаруживают клетки бактерий, грибов, включения, которых не должно быть в норме, например, кристаллы мочевой кислоты или холестерина.

Биохимический анализ крови (биохимия крови) назначается с целью оценки состояния отдельных органов, систем и тканей организма, определения дефицита витаминов и микроэлементов. Чаще всего его применяют в диагностике заболеваний печени, почек, пищеварительной системы, сердечно-сосудистой системы.

В биохимическом анализе крови можно исследовать больше 40 показателей. В каждом конкретном случае врач назначает пациенту, какие именно показатели биохимии крови необходимо исследовать.

Основными методами биохимического анализа крови являются биохимические реакции. После проведения необходимой реакции кровь исследуют с помощью специальной аппаратуры, например, фотоэлектроколориметра. Для проведения расчетов часто используют построение специальных калибровочных графиков. Во время исследования биохимии крови применяются химические реактивы, необходимые приборы.

Специфика методов биохимического анализа крови требует точного соблюдения этапов проведения химических реакций, профессионализма врачей-лаборантов.

Иммуноферментный анализ (ИФА) крови – это лабораторное определение в крови антител и антигенов. Данный метод анализа бывает качественным (показывает отсутствие или наличие антигенов и антител) или количественным (определяет количество антител или антигенов).

На чем же основан данный метод анализа крови? В случае попадания в организм человека чужеродных микроорганизмов (антигенов) его иммунная система начинает вырабатывать к ним антитела (иммуноглобулины). Это специфические белки, которые имеют способность связываться с определенным антигеном, образовывая комплекс антиген-антитело. Такой комплекс во время проведения ИФА метода анализа крови определяют качественно и количественно.

В расшифровке анализа крови методом ИФА различают антитела трех классов – иммуноглобулины IgA, IgM и IgG. Они появляются в крови в разные промежутки времени от момента инфицирования.

Иммуноглобулины IgM появляются в крови самыми первыми, примерно на пятые сутки после начала болезни. Определить антитела этого класса можно в течение 5-8 недель с момента инфицирования, после чего они исчезают. Также иммуноглобулины класса IgM часто вырабатываются в период обострения хронического заболевания.

Иммуноглобулины класса IgG можно выявить ИФА методом анализа крови через 3-4 недели от попадания инфекции в организм. После этого они могут оставаться в крови на протяжении нескольких месяцев или лет. Если две пробы, последовательно взятые через две недели, показывают повышение количества иммуноглобулинов IgG, можно говорить о текущем инфекционном заболевании или реинфекции (повторное инфицирование той же инфекцией после выздоровления). Данный класс антител обеспечивает иммунитет после вакцинации или перенесенной болезни.

Согласно расшифровке анализа крови методом ИФА через 2-4 недели после заражения или обострения болезни в крови определяются иммуноглобулины класса IgA. Большее количество данных антител находится в секрете слизистых оболочек, а около 20% их циркулирует в крови человека. Исчезают иммуноглобулины IgA из кровотока через 2-8 недель после излечения. Их исчезновение является критерием выздоровления. В случае, когда после окончания болезни ИФА метод анализа крови выявил наличие антител класса IgA, говорят о хроническом течении инфекционного заболевания.

Приведем расшифровку анализа крови методом ИФА, в которой (+) означает положительный результат, (-) означает отрицательный результат.

  • IgA (-), IgM (-), IgG (-) – иммунитет к инфекции отсутствует.
  • IgA (-), IgM (-), IgG (+) – наличие постинфекционного или поствакцинального иммунитета.
  • IgA (+), IgM (+), IgG (+) – острая инфекция.
  • IgA (-), IgM (+), IgG (-) – острая инфекция.
  • IgA (+), IgM (+), IgG (+) – хроническая инфекция в стадии обострения.
  • IgM (-) – выздоровление.

ИФА метод анализа крови дает возможность определять не только содержание отдельных белков (антител, гормонов, ферментов), но также их взаимодействие. Кроме того, с помощью данного метода исследования крови можно определять специфичность нужных антител, следить за их образованием, идентифицировать белки. Все это дает возможность врачу не только диагностировать заболевание, но и следить за процессом его протекания, контролировать эффективность проводимой терапии.

Метод ИФА активно применяют в диагностике вирусов: возбудителей гриппа и парагриппа, аденовируса, энтеровируса, риновируса, метапневмовируса, коронавируса.

источник

Овладение студентами методикой общего клинического анализа крови и клинической оценкой полученных данных.

Морфологическое исследование крови состоит из:

— определения количества гемоглобина,

— определения количества эритроцитов и

— подсчета лейкоцитарной формулы,

— цветового показателя, а также

— определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ).

Реже присоединяют подсчет ретикулоцитов, тромбоцитов.

Для морфологического исследования достаточно того количества крови, которое можно получить из укола в палец.

Исследования крови следует всегда производить в одно тоже время при одинаковых условиях, до приема пищи. Кровь берут из IV пальца левой руки. Перед уколом палец дезинфицируют и обезжиривают, протирая его ватой, смоченной спиртом, а затем

эфиром или их смесью. Прокол производят либо стерилизованным скарификатором, либо иглой Франка со сменными стерилизуемыми лезвиями. Укол обычно производится в верхушку мякоти первой фаланги на глубину 2,5 — 3 мм. Полученную после укола первую каплю снимают фильтровальной бумагой или ватой, смоченной эфиром. Кровь для исследования берут в определенном порядке: для

определения СОЭ, гемоглобина, затем — для подсчета лейкоцитов и эритроцитов; делают мазки. После взятия крови, мякоть пальца оборачивается смоченной эфиром или спиртом ватой и прижимается к ладони для того, чтобы остановить кровотечение.

Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ)

3. 5% раствор лимоннокислого натрия (свежеприготовленный) .

5. Игла Франка или скарификатор.

Аппарат Панченкова состоит из штатива с капиллярами (12 шт.) шириной 1 мм, на стенке которых нанесены деления от 0 (сверху) до 100 (снизу). На уровне 0 имеется буква К (кровь), а на середине пипетки, около метки 50 — буква Р (реактив).

В капилляр Панченкова набирают 5% раствор лимоннокислого натрия до метки 50 (буква Р) и выдувают на часовое стекло. Из укола пальца, держа капилляр горизонтально, набирают кровь до метки 0 (Буква К). Затем выдувают кровь на часовое стекло с лимоннокислым натрием, после чего вторично набирают кровь до метки 0 и выпускают дополнительно к первой порции.

Следовательно, на часовом стеклышке имеется соотношение цитрата и крови, равное 1:4 , т. е. четыре объема крови в один объем реактива. Перемешивают кровь концом капилляра, набирают ее до метки 0 и ставят в аппарат Панченкова строго вертикально. Через час отмечают число миллиметров столбика плазмы.

В норме СОЭ равна для мужчин 4-10 мм, для женщин 4-15 мм в час.

Определение содержания гемоглобина

2. Пипетка от гемометра Сали.

7. Игла Франка или скарификатор.

Для количественного определения гемоглобина пользуются обычно колориметрическим способом. Принцип определения заключается в превращении гемоглобина крови в солянокислый гематин и сравнении цвета полученного с имеющимся в приборе стандартом. Прибором для определения служит гемометр Сали. Он состоит из двух запаянных

пробирок со стандартной цветной жидкостью 1% раствор солянокислого гематина в глицерине), содержащей 16,67 г% гемоглобина (16,67 г на 100 мл крови). Между ними расположена градуированная пробирка, имеющая две шкалы. Одна — с делениями от 0 до 23 служит для определения гемоглобина в граммах на 100 мл крови, т. е. в грамм процентах; другая шкала с делениями от 0 до 140 показывает единицы гемоглобина (процент гемоглобина).

В градуированную пробирку, находящуюся в среднем прорезе, наливают до начала шкалы 0,1N раствор соляной кислоты. Затем из места укола на мякоти пальца пипеткой Сали набирают кровь до метки 0,02 мл (20 мм3), насасывая ее ртом через надетую на верхний конец пипетки резиновую трубочку со стеклянным мундштуком. Кончик пипетки обтирают от крови и опускают в пробирку с соляной кислотой, осторожно выдувая содержимое, чтобы не образовались пузырьки воздуха. Ударяя пальцем по нижней части пробирки, тщательно размешивают кровь и оставляют ее на 5 мин. для образования солянокислого гематина. За это время набирают кровь для остальной части анализа. По истечении этого времени приливают в пробирку по каплям дистиллированную воду, размешивая стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет раствора исследуемой крови полностью сравняется с цветом стандартной жидкости. Отмечают, на каком делении находится в градуированной пробирке нижний мениск раствора крови, показывающий содержание гемоглобина в г% или единицах (процентах).

В норме содержание гемоглобина в грамм-процентах у мужчин колеблется от 13,3 до 18 г%, у женщин — от 11,7 до 15,8 г% (в среднем 13,7); в единицах (процентах) у мужчин — от 80 до 108 ед., у женщин — от 70 до 95 ед.

Определение количества эритроцитов и лейкоцитов

1. смесители (меланжеры) или пробирки для подсчета эритроцитов и лейкоцитов.

2. 3% — раствор NaCl (для разведения эритроцитов) или жидкость Гайема.

3. 3% раствор уксусной кислоты.

Смесители представляют собой капиллярную пипетку с расширением- ампулой, содержащей бусинку, способствующую смешению крови с разводящей жидкостью. Смесители, предназначенные для подсчета эритроцитов, обладают капилляром более тонкого калибра и более объемистой ампулой на них нанесены метки одна — 0,5 другая — перед входом в ампулу — 1.0, третья — у выхода из ампулы — 101.

При набирании крови до метки 0,5 она окажется разведенной в 200 раз, при набирании до 1,0 — в 100 раз. Для разведения эритроцитов применяют 3% раствор поваренной соли или жидкость Гайема, в которой лучше сохраняется форма эритроцитов. Смеситель для лейкоцитов имеет более широкий просвет капилляра и меньшую по величине ампулу. Нанесены три метки: 0,5 , 1,0 и 11. Это позволяет развести кровь в 10, либо в 20 раз (чаще разводят в 20 Раз). Для разведения лейкоцитов используют 3 — 50% раствор уксусной кислоты. Уксусная кислота растворяет эритроциты, что позволяет вести подсчет только лейкоцитов.

Для подсчета форменных элементов наиболее часто применяется камера типа Бюркера с выгравированной на ней сеткой Горяева. Счетная камера состоит из толстого предметного стекла с особым углублением. На дне углубления счетной камеры выгравирована сетка, в клетках которой и подсчитываются форменные элементы. По краям углубления имеются возвышения, куда накладывается покровное стекло. Между нижней поверхностью этого стекла и дном углубления образуется замкнутое пространство, которое и представляет собой счетную камеру. Глубина камеры соответствует 0,1 мм. Счетная камера типа Бюркера разделена пополам глубокой канавкой и имеет на каждой половине сетку Горяева, что позволяет сразу считать 2 капли, не заполняя вновь камеры. Сетка Горяева имеет 225 больших квадратов (15Х15), 25 из которых разделены на малые, по 16 в каждом; имеются также пустые квадраты, собранные в группы по 4 квадрата. Всего в сетке 100 больших пустых квадратов, собранных в 25 групп (5X5). Каждая сторона маленького квадратика равна 1/20 мм, а так как высота камеры составляет 0,10 мм, то объем равен 1/4000 ммЗ.

Для подсчета эритроцитов берут смеситель для эритроцитов, надевают резиновую трубочку, легким насасыванием набирают кровь из укола до метки 0,5. Избыток крови удаляют фильтровальной бумагой, после чего кончик смесителя погружают в приготовленный заранее флакон с 3% раствором поваренной соли или раствором Гайема и насасывают раствор, заполняя всю ампулу до метки 101. Тотчас снимают резиновую трубку, зажимают смеситель по длине между большим и указательным или средним пальцем и встряхивают в течение 3 минут. После этого заполняют счетную камеру, сливают

1-2 капли и выпускают последующую каплю на сетку.

Для подсчета лейкоцитов кровь из места укола набирают до метки 0,5, затем разводят 3% раствором уксусной кислоты до метки 11. Энергично встряхивают в течение 3 минут, после чего сливают

1-2 капли и заполняют счетную камеру. При работе с пробирками

для подсчета эритроцитов, наливают 4 мл 3% раствора поваренной соли или жидкости Гайема и в нее выпускают 0,02 мл. крови,

отмеренной пипеткой от гемометра Сали. Для подсчета белых кровяных элементов в пробирку наливают 0,4 мл 3 — 5% раствора

уксусной кислоты и 0,02 мл крови. Энергично встряхивают пробирки, затем в жидкость опускают пипетку из гемометра Сали и,

набрав содержимое, заполняют счетную камеру.

Хорошо вымытое и вытертое шлифованное покровное стекло накладывают на выступающие боковые края. Мякотью больших пальцев покровное стекло притирают, двигая вверх и вниз, все время плотно прижимая, пока не появятся, так называемые, Ньютоновы кольца. Перед заполнением камеры вновь энергично встряхивают смесители. выпускают 2 капли на фильтровальную бумагу, а третьей заполняют щелку между камерой и покровным стеклом. Жидкость по капиллярности засасывается между ними и заполняет пространство над сеткой. Жидкость при заполнении камеры не должна затекать в желобки, если это стучится, то ее удаляют фильтровальной бумагой.

Подсчет эритроцитов. Подсчет производят спустя 1-2 минуты (когда эритроциты осядут на дно камеры), пользуясь объективом 40Х и окуляром 7X, либо объективом 8Х и окуляром 15Х.

Чтобы не сбиться со счета, придерживаются определенной

последовательности счета: передвигая из квадрата в квадрат по

горизонтали один ряд слева направо, следующий — справа налево. Считают, помимо находящихся внутри квадрата, все эритроциты, лежащие на двух линиях, например, на левой и верхней, и пропускают все лежащие справа и снизу. Считать эритроциты надо в 5 больших квадратах, т. е. в 80 маленьких.

Чтобы избежать неточности, вследствие не вполне равномерного распределения крови в камере, выбирают для подсчета не 5 рядом лежащих квадратов, а продвигаются по всей сетке.

Количество эритроцитов в 1 ммЗ (искомое) вычисляют следующим образом: единицей счета всегда, при всяком подсчете, в любой сетке служит малый квадрат. Объем его, как было указано, равен 1/4000 мм3. Сосчитав эритроциты в 5 больших квадратах (80 малых квадратов), делят это количество на 80 и умножают на 200 (степень разведения крови) и на 4000 (чтобы получить количество

клеток во всем кубическом миллиметре);практически, следовательно, полученное число умножают на 10000 (прибавляют четыре нуля).

Пример: В 80 маленьких квадратах подсчитано 480 эритроцитов. Следовательно, количество эритроцитов в 1 ммЗ крови равно:

Подсчет лейкоцитов. Для получения достаточно точного результата при подсчете лейкоцитов необходимо сосчитать не менее 100 больших квадратов (=1600 малых). Количество лейкоцитов в 1 мм3 получается следующим образом: число, сосчитанное в3100 больших квадратах, делят на 1600 (приводят к 1 малому квадрату) и умножают на 20 (степень разведения) и на 4000; практически, сокращая постоянные цифры формулы, количество сосчитанных лейкоцитов (при разведении в 20 раз) умножают на 50.

Пример: в 100 больших квадратах сосчитано 120 лейкоцитов.

Следовательно, количество лейкоцитов в 1 ммЗ равно

Нормальное количество эритроцитов в 1 ммЗ от 4500000 до 5000000. В норме среднее количество лейкоцитов в 1 мм3 от 5000 до 9000 (крайние границы 4000 — 9000).

Вычисление цветового показателя:

Зная число эритроцитов в крови и содержание в ней гемоглобина, можно высчитать в какой мере насыщен каждый эритроцит. Цветовой показатель соответствует максимальному содержанию гемоглобина в одном нормальном эритроците, величина его условно принимается за единицу.

Для вычисления цветового показателя пользуются следующей формулой:

найденное количество Нв найденное число эритроцит.

нормальное количество Нв нормальное число эритроцит.

Практически определение цветового показателя производят путем деления процента (единиц) гемоглобина на удвоенные две первые цифры числа эритроцитов. Если же число эритроцитов меньше 1000000, то процент Нв делится на удвоенную первую цифру числа эритроцитов.

Мазок крови делают обычно вслед за наполнением обоих смесителей. Вытирают палец и пользуются свежевыступившей каплей крови. Кровь берут на предметное стекло, которое должно быть тщательно обезжирено. Затем шлифованным предметным стеклом,

или толстым покровным стеклом, которое ставят на первое предметное стекло под углом 45′ в непосредственной близости от капли крови, чтобы она растекалась тонким слоем по ширине шлифованного стекла, делают на нем мазок. Хорошо сделанный мазок желтоватого цвета, просвечивает. Вслед за этим мазок фиксируют.

Фиксация мазка делается для того, чтобы уплотнить протоплазму форменных элементов крови и сделать мазок более устойчивым. Высохший на воздухе мазок погружается для фиксации в банку с метиловым спиртом на 1 — 3 мин., либо в смесь Никифорова, состоящую из равных частей этилового спирта и эфира, на 10-20 минут. По окончании фиксации мазки вынимают пинцетом и ставят в вертикальном положении на фильтровальную бумагу для высушивания.

0крашивание мазка производится, как правило, при помощи смеси нескольких красок. Наиболее широко применяется окраска мазка по Романовскому — Гимзе. Перед употреблением краску разводят дистиллированной водой из расчета 1 — 2 капли на 1 мл воды. Мазки укладывают на мостики из стеклянных палочек, опирающихся на края кюветы, и заливают красителем в максимальном количестве, которое может удержаться на стекле. Продолжительность окраски 30 минут. После окраски краситель смывают струей воды, а мазки ставят вертикально на фильтровальную бумагу для просушки.

1. Предметные стекла (обезжиренные).

2. 1% раствор бриллианткрезилблау (спиртовой).

3. Шлифовальное предметное стекло.

На обезжиренное абсолютно чистое предметное стекло наносят стеклянной палочкой каплю 1% алкогольного раствора краски бриллианткрезилблау. Шлифовальным предметным стеклом

эту каплю размазывают так же, как при приготовлении обычного

мазка крови. После подсыхания красителя на него наносят каплю

крови и делают тонкий мазок, который сразу помещают во влажную камеру (чашка Петри с вложенным в нее кусочком мокрой фильтровальной бумаги). Через 3-5 минут мазок вынимают, высушивают на воздухе и исследуют под микроскопом с иммерсией.

Под микроскопом эритроциты при этой окраске желтовато-зеленоватого цвета; в отдельных же эритроцитах замечается синяя

сеточка, иногда скудная и нежная, иногда обильная, зернистая —

Подсчет ретикулоцитов производится так:

Подсчитывают в поле зрения 1000 эритроцитов и отмечают сколько среди них ретикулоцитов. Найденное количество делят на 10. Нормальное содержание ретикулоцитов в крови 0,2 — 1,0%.

Подсчет лейкоцитарной формулы:

Лейкоцитарной формулой называют процентное соотношение

отдельных форм лейкоцитов крови. Для более точного ее вычисления необходимо просмотреть не менее 200 лейкоцитов. Так как различные виды лейкоцитов распределяются по мазку неравномерно,

необходимо соблюдать следующие правила: проводить подсчет по

верхнему и нижнему краю мазка, передвигая мазок по зигзагообразной линии. Считают три поля по самому краю в горизонтальном направлении, затем — три поля, направляясь к середине мазка, и т. и. Следовательно, в каждом из четырех участков насчитывают 50 клеток, а всего — 200. Для подсчета лейкоцитарной формулы используют специальный клавишный счетчик, на каждом клавише которого отмечается начальная 6yква названия лейкоцитов. Результаты подсчета лейкоцитарной формулы записываются в виде лейкограммы, имеющей в норме примерно следующий вид:

источник

1. Клиническая трактовка результатов общего анализа крови (см. ход занятия, п.2-5).

2. Проведение макроскопического, микроскопического, бактериоскопического и бактериологического исследования мокроты (см. ход занятия, п.7).

3. Проведение макроскопического, физико-химического и бактериологического исследования плевральной жидкости (см. ход занятия, п.9).

4. Клиническая оценка результатов лабораторного анализа мокроты и плевральной жидкости (см. ход занятия, п.7,9).

В ходе занятия обсуждаются контрольные вопросы согласно темы занятия и отрабатываются практические навыки (п.4.).

Взятие крови для общего клинического анализа крови производят путем укола в мякоть IV пальца левой руки или мочку уха. Для укола палец обрабатывают ватным шариком, смоченным раствором антисептика, чаще всего септоцида. Укол лучше производить сбоку, где более густая капиллярная сеть, на глубину 2-3 мм в зависимости от толщины кожи. Кровь из ранки должна вытекать свободно, так как при сильном надавливании на палец возможно примешивание тканевой жидкости, приводящее к искажению результатов.

Не рекомендуется брать кровь сразу после физической и умственной нагрузки, приема медикаментов, физиотерапевтических процедур, диагностических манипуляций. Необходимо производить забор крови натощак. Повторные исследования желательно проводить в одни и те же часы, поскольку морфологический состав крови подвержен колебаниям на протяжении суток.

Для исследования гемограммы используют пробирочный метод взятия крови. Точная дозировка крови и разводящих жидкостей достигается с помощью калиброванных пипеток и дозаторов.

Общий клинический анализ крови включает определение следующих компонентов:

3) индексы красной крови (цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците);

4) скорость оседания эритроцитов (СОЭ);

6) осмотическая резистентность эритроцитов и их диаметр;

7) количество ретикулоцитов;

8) количество лейкоцитов и лейкоцитарная формула;

2. Методика определения концентрации гемоглобина, количества эритроцитов и ретикулоцитов. Расчет индексов красной крови: цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. Диагностическое значение. Гематокритное число.

Предложено много методов определения концентрации гемоглобина. Важнейшие из этих методов – колориметрические. Чаще колориметрируют цветные производные гемоглобина: хлорид гематина, цианметгемоглобин, карбоксигемоглобин и др. Концентрацию гемоглобина измеряют фотоэлектроколориметрами, приборами ГФ-2 и ГФ-3, гемоглобинометрами при автоанализаторах.

Унифицированным является цианметгемоглобиновый фотометрический метод. Он основан на превращении гемоглобина в цианметгемоглобин при добавлении к крови реактива (раствора Драбкина), содержащего железосинеродистый калий и цианид калия. Концентрацию цианметгемоглобина измеряют фотометрически, а расчет количества гемоглобина производят по калибровочному графику.

Гематиновый метод Сали основан на превращении гемоглобина при добавлении к крови хлористоводородной кислоты в хлорид гематина (хлоргемин) коричневого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. В настоящее время этот метод не имеет широкого применения.

В норме концентрации гемоглобина составляет:

Увеличение концентрации гемоглобина наблюдается у людей, живущих в условиях высокогорья, при обезвоживании у работников горячих цехов, после обильной рвоты и при диарее, при массивных ожогах, при эритремии и др.

Уменьшение концентрации гемоглобина наблюдается при анемиях, а так же при обильном употреблении жидкости, гемодилюции лекарственными инфузионными средствами и др.

Определение количества эритроцитов крови выполняется следующими методами:

Подсчет эритроцитов в счетной камере с сеткой Горяева.

Принцип метода: в строго определенном объеме каме­ры подсчитывают под микроскопом клеточные элементы, а затем производят перерасчет полученного результата на 1 мкл крови. С целью уменьшения количества клеток, подлежащих подсчету, кровь предварительно разводят в смесителях или пробирках.

смесители (меланжеры) или пробирки для разведе­ния крови;

3 % раствор хлорида натрия или жидкость Гайема для разведения эритроцитов (ртути хлорид — 0,5 г; натрия сульфат — 5,0 г; натрия хлорид — 1,0 г; вода дистиллиро­ванная — до 200 мл);

Смесители представляют собой капиллярную пипетку с резервуаром, содержащим бусинку, способствующую смешиванию крови с жидкостью для разведения. На сме­сителе нанесены метки: одна — 0,5, другая — перед входом в резервуар — 1,0, третья — у выхода из ампулы — 101. При набирании крови в пипетку до метки 0,5 она будет разве­дена в 200 раз, до 1,0 — в 100 раз.

Счетная камера представляет собой стеклянную плас­тинку с выгравированной или наклеенной сеткой Горяе­ва. Обычно на одной пластинке имеются две сетки, разде­ленные между собой глубокой канавкой, что позволяет ис­пользовать одну сетку для подсчета эритроцитов, а другую — для подсчета лейкоцитов. По краям сеток находятся воз­вышения, к ним притираются покровные стекла, которые образуют верхнюю границу камеры. Притирать покров­ные стекла нужно очень плотно до появления радужных колец (так называемых колец Ньютона), ибо только в этом случае будут соблюдены необходимые высота (1/10 мм) и объем счетной камеры. Сетка Горяева имеет 225 больших квадратов (15 х15), 25 из которых раз­делены на малые, по 16 в каждом. Каждая сторона малого квадрата равна 1/20 мм, а так как высота камеры состав­ляет 0,1 мм, то объем счетной камеры, ограниченной од­ним малым квадратом, будет равен 1/4000 мм 3 .

Ход исследования: в сухую чистую пробирку или сме­ситель отмеривают раствор хлорида натрия или жидкость Гайема. Пипеткой от гемометра Сали набирают кровь из пальца, вытирают кончик пипетки марлей или фильтро­вальной бумагой, выдувают кровь на дно пробирки с жидкостью для разведения. Подготавливают камеру Горяева. Затем концом круглой стеклянной палочки или пастеровской пипеткой наносят каплю разведенной кро­ви на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла.

Интерпретация полученных данных. Подсчет эрит­роцитов производят спустя 1-2 мин после заполнения ка­меры (когда эритроциты осядут на дно камеры) при малом увеличении микроскопа (объектив 8х, окуляр — 10х или 15х) и при затемненном поле зрения (при опущенном кон­денсоре или прикрытой диафрагме). Считать эритроциты необходимо в 5 больших квадратах, т. е. в 80 маленьких, расположенных по диагонали. Подсчету подлежат все эритроциты, лежащие внутри малого квадрата, и те, кото­рые находятся на левой и верхней линиях. Эритроциты, расположенные на правой и нижней линиях, не считают, так как они будут учтены в следующем квадрате.

Количество эритроцитов в 1 мкл (мм 3 ) крови высчиты­вают по следующей формуле:

где X — количество форменных элементов в 1 мкл крови; А — количество форменных элементов, сосчитанных в опреде­ленном количестве малых квадратов (для эритроцитов — в 80); Б — количество сосчитанных малых квадратов (80); В — степень разведения крови (для подсчета эритроцитов -100 или 200); 4000 — величина, умножая на которую, мы получаем количество клеток в 1 мкл (1 мм 3 ), так как объ­ем 1 маленького квадрата равен 1/4000 мм.

Для перевода в систему СИ (пересчет на 1 л крови) по­лученную цифру умножают на 10 6 (или количество целых единиц умножают на 10 12 ).

Методика подсчета эритроцитов в счетной камере дос­таточно точна (ошибка может достигать 2,5 %), но весьма трудоемка. Ошибки могут быть обусловлены: образовани­ем сгустка, недостаточным количеством подсчитанных квадратов, несоблюдением условий, обеспечивающих правильную высоту счетной камеры (притирание покров­ных стекол без образования радужных колец), неравно­мерным заполнением камеры (образование пузырьков воздуха), подсчетом эритроцитов без выжидания 1-2 мин (эритроциты не успевают осесть и результат оказывается заниженным), плохо вымытыми смесителем и счетной ка­мерой, недостаточной квалификацией лаборанта, выпол­няющего исследование.

Фотометрический метод подсчета количества эритроцитов – основан на фотометрическом измерении степени погашения света определенных длин волн взвесью эритроцитов. Процент задержанного света прямо пропорционален числу эритроцитов. Для этого используют приборы типа эритрогемометров и электрофотоколориметры.

Электронно-автоматический метод. Используются приборы автоматического счета частиц крови, работающие по импульсному и сцинтиляционному принципу (счетчики «Целлоскоп» и «Культер», автоанализаторы «Техникон»).

Нормальное количество эритроцитов:

— у женщин 3.7 – 4.7 х 10 12 /л;

— у мужчин 3,9 — 5,1 х 10 12 /л.

Увеличение количества эритроцитов наблюдается:

1) при эритремии (абсолютный первичный эритроцитоз);

2) при гипоксии: обструктивная вентиляционная недостаточность, при наличии альвеолярно-капиллярного блока – фиброзирующий альвеолит и легочные васкулиты, врожденные пороки сердца с шунтом справа налево и др;

3) при гемоглобинопатиях (наследственные заболевания, характеризующиеся наличием в эритроцитах аномальных гемоглобинов);

4) при вторичных абсолютных эритроцитозах, связанных с повышенной продукцией эритропоэтинов (рак почек, гидронефроз и поликистоз почек, рак печени и др.);

5) при вторичных абсолютных эритроцитозах, связанных с избытком адренокортикостероидов или андрогенов (феохромоцитома, синдром / болезнь Иценко-Кушинга, гиперальдостеронизм);

6) при относительных эритроцитозах вследствие обезвоживания, стрессов, алкоголизма, повышенной физической нагрузки, проживания в условиях высокогорья и др.

Уменьшение количества эритроцитов характерно для анемий различного происхождения. От истинной анемии, характеризующейся абсолютным уменьшением эритроцитарной массы, нужно отличать анемию (эритроцитопению) вследствие гидремии (снижение гематокрита из-за увеличения объема плазмы).

Уменьшение количества эритроцитов (анемия, эритроцитопения) наблюдается при постгеморрагических анемиях, анемиях вследствие недостаточного кровеобразования (железодефицитная, витамин-В12- и фолиеводефицитная), анемиях в результате усиленного распада эритроцитов (гемолитические), железоперераспределительных и метапластических (при опухолевых заболеваниях крови) анемиях и др.

Расчет индексов красной крови: цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците.

Под индексами красной крови понимают среднее содержание гемоглобина в одном эритроците и цветовой показатель.

Определение среднего содержания гемоглобина в одном эритроците производят делением концентрации гемоглобина на число эритроцитов в одинаковом объеме крови. В норме 1 эритроцит содержит 33 пг гемоглобина (допустимые колебания 27-33.4 пг).

Величину 33 пг условно принимают за единицу (норма содержания гемоглобина в одном эритроците) и обозначают как цветовой показатель.

Цветовой показатель отражает насыщение эритроцита гемоглобином.

Вычисление цветового показателя (ЦП) производят по формуле:

три первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)

две первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)

ГЕМОГЛОБИН (в условных единицах)

две первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)

В норме цветовой показатель равен 0,85 – 1,05.

Индексы красной крови важны для суждения о нормо-, гипер-, гипохромии эритроцитов.

Гиперхромия – увеличение среднего содержания гемоглобина в 1 эритроците, дающее цветовой показатель выше 1.05, зависит исключительно от увеличения объема эритроцитов, а не от повышенного насыщения их гемоглобином, так как нормальный эритроцит насыщен гемоглобином до предела. Гиперхромия характерна для мегалобластных анемий, обусловленных дефицитом витамина В12 и фолиевой кислоты.

Гипохромия – уменьшение среднего содержания гемоглобина в 1 эритроците, дающее ЦП ниже 0.85, может быть так же следствием уменьшения объема эритроцитов. Гипохромия служит истинным показателем или дефицита железа в организме, или железорефрактерности. Гипохромия наблюдается при хронических кровопотерях, железодефицитных и железорефрактерных анемиях, свинцовой интоксикации и др.

Нормохромия – это нормальное содержание гемоглобина в эритроците (ЦП -0,85-1,05). Нормохромные анемии развиваются при равномерном уменьшении содержания эритроцитов и количества гемоглобина и наблюдается в случаях острых кровопотерь, при гипопластической анемии, при гемолизе, сепсисе.

Гематокрит (гематокритное число) – дает представление о соотношении между объемом плазмы и объемом форменных элементов крови. Определяется с помощью следующих методов.

Метод центрифугирования в гематокритной трубке.

Электронно-автоматический метод (с помощью аппаратов «Целлоскоп» и «Культер»).

Нормальные величины гематокрита:

Гематокритное число учитывается при диагностике полицитемических и олигоцитемических состояний.

Ретикулоциты – это молодые эритроциты, содержащие базофильную субстанцию в виде сеточки, представленную агрегированными рибосомами и митохондриями. Сеточка обнаруживается при прижизненной окраске мазков крови 1% раствором бриллианткрезил синего. Подсчет производится под иммерсионным объективом по отношению к 1000 эритроцитов.

В норме содержание ретикулоцитов в периферической крови составляет 2-10º/○○ (0,2-1,2%). Ретикулоцитоз отображает степень регенераторной способности костного мозга. При гемолизе, кровопотерях эритропоэз в нормальном костном мозге активизируется, и число ретикулоцитов в нем и в периферической крови возрастает. Отсутствие роста числа ретикулоцитов в выше указанных ситуациях свидетельствуют о пониженной функции костного мозга.

Ретикулоцитоз при отсутствии анемии говорит о скрытых, но хорошо компенсированных потерях крови. Высокий ретикулоцитоз наблюдается при адекватном лечении витамин-В12-дефицитной анемии.

источник

Тема: Лабораторные методы исследования.

1) Лабораторные методы исследования.

2) Исследование крови. Общий клинический анализ крови. Показатели нормальной картины крови. Подготовка пациента к забору крови на исследование. Порядок взятия крови из пальца. Определение основных показателей простейшими методами.

3) Биохимическое исследование крови. Основные показатели, диагностическое значение. Взятие крови на серологическое исследование (реакция Вассермана, HBS-антиген, ВИЧ-инфицированность), стерильность.

4) Общие требования к технике забора крови, безопасности медицинского работника. Правила оформления направления, транспортировки проб крови в лечебно-профилактических учреждениях. Роль постовой, процедурной медицинской сестры.

5) Исследование мочи. Содержание и диагностическое значение общего анализа мочи. Исследования мочи по Зимницкому, Нечипоренко, Аддис-Каковскому, бактериологическое исследование мочи, диагностическое значение их, правила забора и доставки в лабораторию.

6) Исследование мокроты. Общие требования к взятию мокроты на общий анализ, на БК, бактериологический анализ.

7) Исследование кала. Общие требования к взятию и направлению на исследование на копрограмму, яйца глистов, энтеробиоз, скрытую кровь, бактерологическое исследование кала. Роль медицинской сестры в подготовке пациента к сбору материала на исследование.

8) Исследование желудочного и дуоденального содержимого. Получение желудочного содержимого для исследования путем желудочного зондирования тонким зондом фракционным методом. Получение дуоденального содержимого для исследования путем дуоденального зондирования трехфазным методом. Подготовка пациента к зондированию.

Лабораторные методы находят широкое применение в клинической практике. Исследуются экскреты и секреты организма, испражнения, кровь, экссудаты и транссудаты. Проводятся они в следующих направлениях:

1) изучение общих свойств исследуемого материала, в том числе физических (количество, цвет, вид, запах, на­личие примесей, относительная плотность и т. д.);

2) микроскопическое исследование;

3) химическое исследование с целью определения при­сутствия тех или иных веществ (вещества, содержащиеся в норме в жидкостях организма, и вещества, которые по­являются только при заболеваниях);

4) бактериологическое и вирусологическое исследования;

5) серологическая диагностика;

6) гистология и цитология пунктатов органов;

7) иммунологические исследования.

Исследование крови.

1) форменные элементы (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты);

2) плазма крови, в состав которой входят белки, ферменты, гормоны и другие вещества.

1) дыхательная (снабжение тканей кислородом и перенос углекислого газа от них);

2) защитная (выработка антител, фагоцитов);

3) обменно-экскреторная (удаление из организма конечных продуктов обмена: мочевины, аммиака и др.);

4) питательная (транспортировка глюкозы, белков, жиров);
5) функция гемостаза (поддержание в сосудистом русле определенного количества и качества крови);

6) физико-химическая (поддержание осмотического рав­новесия тканей, обмен микроэлементов (кальция, ка­лия, фосфора, натрия), обмен воды);

Различают общеклиническое и биохимичес­кое исследование крови.

Цель общеклинического исследования кро­ви — изучение количественного и качественного состава форменных элементов крови (лейкоциты, эритроциты, тромбоциты), определение количества гемоглобина (Нв) и скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Клеточный состав крови здорового человека относительно постоянен, поэтому его изменения указывают на патологические про­цессы в организме. Небольшие колебания состава крови у здорового человека могут быть связаны с приемом пищи, физической нагрузкой, психоэмоциональным состоянием, количеством принятой жидкости и др. Для устранения этих влияний кровь для исследования берут ут­ром, натощак. Обычно кровь для исследования берется из пальца или локтевой вены.

Количество эритроцитов в норме составляет у муж­чин: 4,0—5,5 х 10 |2 /л, у женщин — 3,7—4,7 х 10 12 /л.

Количество Нв в норме у мужчин составляет 130—160 г/л, у женщин — 120—140 г/л.

Основная функция эритроцитов – транспортировка кислорода. Увеличение количества эритроцитов называют эритроцитозом. Абсолютный эритроцитоз наблюдается при усиленном эритропоэзе, относительный – при сгущении крови. Уменьшение количества эритроцитов в единице объема крови – эритропения, а в сочетании с уменьшением гемоглобина – анемия. Пойкилоцитоз – разные по форме, анизоцитоз – разные по величине эритроциты.

Цветовой показатель – это соотношение числа эритроцитов и количества гемоглобина в них. В норме он колеблется от 0,85 до 1,1-1,15.

Количество лейкоцитов в норме колеблется от 4,0 до 9,0 х 10 9 /л.

Лейкоцитоз – увеличение количества лейкоцитов в крови больше нормы. Физиологическое наблюдается после приема пищи, при беременности, после физической работы. В патологии – при острых воспалительных процессах, некоторых инфекционных заболеваниях, ин­фаркте миокарда, лейкозах и др.

Лейкопения — уменьшение количества лейкоцитов в крови. Отмечается при лучевой болезни, вирусных заболеваниях, после приема некоторых лекар­ственных препаратов.

В дифференциально-диагностическом значении важно изучение лейкоцитарной формулы (процентное соотноше­ние различных форм лейкоцитов). Лейкоциты, имеющие в протоплазме зернистость, называются гранулоцитами — это нейтрофилы, базофилы, эозинофилы. Лейкоциты, не имеющие зернистости в протоплазме, называются «агранулоцитами». К ним относятся лимфоциты и моноциты. Отсутствие в формуле (в крови) гранулоцитов называется «агранулоцитозом». Агранулоцитоз — плохой прогностический признак.

Нейтрофилы составляют 50-70% от всех лейкоцитов. Молодые нейтрофилы: палочкоядерные — 2-5%, юные — 0-1%. Зрелые — сегментноядерные: 51-67%. Нейтрофи­лы выполняют в организме защитную функцию.

Увеличение молодых форм нейтрофилов обозначается как «сдвиг лейкоцитарной формулы влево». Он наблюда­ется при воспалительных процессах, лучевой болезни, зло­качественной анемии. Уменьшение молодых форм нейтро­филов и увеличение сегментноядерных называется «сдви­гом вправо».

Эозинофилы в крови составляют 2-4%. Увеличение эозинофилов в крови называется «эозинофилией» и встречается при глистной инвазии, кра­пивнице, аллергозах, бронхиальной астме.

Базофилы в норме составляют 0,5-1%, принимают участие в воспали­тельных и аллергических реакциях. Увеличение их встре­чается при хроническом миелолейкозе, уменьшение — при остром лейкозе и др. заболеваниях.

Лимфоциты в норме у здорового человека 23-25%. Уве­личение их в крови — лимфоцитоз — встречается при ин­фекционных заболеваниях в фазу выздоровления, у детей и стари­ков. Уменьшение количества лимфоцитов — лимфопения — появляется цри заболеваниях с повреждением лимфатичес­кой системы (лимфосаркома, лимфогранулематоз).

Моноциты в норме составляют 4-8%. Они выполняют защитную функцию, как и нейтрофилы, являются фаго­цитами (фагоцитируют обломки клеток и микробов). Уве­личение количества моноцитов — моноцитоз — встречается при туберкулезе (диссеминация), при лимфогранулематозе.

Количество тромбоцитов в норме состав­ляет 180—320 тыс. в 1 мкл.

Увеличение количества тромбоцитов — тромбоцитоз — определяется при постге­моррагической анемии, болезнях крови. Уменьшение тром­боцитов — тромбоцитопения — бывает при болезни Верльгофа, гипопластической анемии, лучевой болезни, остром лейкозе и др.

Важным показателем является СОЭ. В нор­ме СОЭ у мужчин составляет 2—10 мм/ч, у женщин — 2—15 мм/ч. СОЭ увеличивается при:

1) септических и гнойных процессах;

2) инфекционно-воспалительных заболеваниях;

3) системных заболеваниях соединительной ткани;

4) заболеваниях почек, печени, злокачественных заболеваниях и т.д.

Техника взятия крови. Кровь для исследования берут ут­ром, натощак. С пациентом необходимо установить доверительные отношения, объяснить пациенту цель и ход процедуры. Кровь берут из 1У-го пальца ле­вой руки. Палец дезинфицируют путем протирания ваткой, смоченной дезраствором. Прокол производят иглами-скарификаторами сбоку в мя­коть фаланги на глубину 2,5-3 мм. Кровь должна посту­пать свободно, так как при сильном надавливании на па­лец к крови примешивается тканевая жидкость. Первую каплю крови стирают сухой стерильной ватой.

Определение основных показателей простейшими методами.

Количество ге­моглобина определяется наиболее точным объективным цианметгемоглобиновым методом. Подсчет эритроцитов производят в счетной камере Горяева. Эритроциты оцениваются в мазке. Обращают внимание на их величину, форму, окраску и клеточные включения. Разведение крови для подсчета лейкоцитов производят в смесителях или пробирках. С помощью 3-5% раствора уксусной кислоты разрушают эритроциты, заполняют счетную камеру Горяева и подсчитывают лейкоциты. Вне кровеносных сосудов в крови, предохраненной от свертывания антикоагулянтами и набранной в вертикально стоящий сосуд, эритроциты начинают оседать под действием силы тяжести. Таким образом определяется СОЭ.

Биохимическое исследование крови заключается в определении в кро­ви сахара, гормонов, ферментов и других факторов обмена веществ в организме.

Кровь для биохимических исследований берется ут­ром между 7.00 и 9.00 часами натощак или через 12 часов после еды из вены в количестве 7-10 мл. До проведения исследования об­разцы крови хранятся в закрытых пробирках в холодильнике. При комнатной температуре кровь сохраняется не более четырех часов, при температуре 4°С — до 3-7 су­ток. Для предупреждения свертывания крови в пробир­ку добавляются антикоагулянты (гепарин).

С помощью реактивов в сыворотке крови определяются следующие ве­щества:

Общий белок сыворотки крови в норме составляет 65-85 г/л. Гиперпротеинемия (повышение уровня общего белка) встречается при различных хронических заболеваниях (хронический гепатит, системные заболе­вания соединительной ткани и др.). Гипопротеинемия (уменьшение общего белка) бывает при потере белка (го­лодание, длительные воспалительные заболевания, рако­вая кахексия и др.). Белковые фракции — это соотноше­ние в сыворотке крови мелкодисперсных белков (альбу­минов) и грубодисперсных (глобулинов). В норме в сыво­ротке крови преобладают альбумины. При патологичес­ких процессах количество глобулинов увеличивается. В норме уровень белковых фракций в крови:

Глобулины делятся на фракции: альфа-1, альфа-2, бета-глобулины, гамма-глобулины. Увеличение фракции а2-глобулинов чаще связано с острыми воспалительными процессами, при нарушени­ях в иммунологических процессах изменяется фракция у-глобулинов.

Уровень ферментов отражает степень клеточной деструк­ции, поражение паренхиматозных органов.

1. Аспартатаминотрансфераза (АсАТ). Уровень фермента в норме 0,1-0,45 ммоль/ч л. Активность ее возрастает при инфаркте миокарда, гепатитах, заболеваниях мышц.

2. Аланинаминотрансфераза (АлАТ). В норме составляет 0,1-0,68 ммоль/ч л. Резко увеличивается при вирусном гепатите и других заболеваниях печени.

3. Лактатдегидрогеназа (ЛДГ). В норме 0,8-4,0 ммоль/ч л. Увеличивается при поражении паренхимы печени, по­чек, сердечной мышцы.

4. Щелочная фосфатаза (ЩФ). В норме 0,5-1,3 ммоль/ч л. Активность ее возрастает при заболеваниях печени, желчевыводящих путей.

Уровень мочевины в норме 2,5-8,3 ммоль/л. Повыша­ется при почечной недостаточности.

Уровень креатинина в норме у мужчин 44-97 мкмоль/ л, у женщин — 44-115 мкмоль/л. Повышается уровень креатинина при почечной недостаточности, причем он повышается раньше, чем уровень мочевины.

Уровень билирубина в норме 8,5-20,5 мкмоль/л. 75% этого объема — свободный (непрямой, неконъюгированный) билирубин (8,6 — 12 мкмоль/л); билирубин связанный (прямой, конъюгированный) — 2,57 – 7,0 мкмоль/л. Повышение общего билируби­на связано с повреждением клеток печени воспалительно­го, токсического и опухолевого характера. Билирубин связанный (неконъюгированный) повыша­ется при обтурации желчных протоков, поражении пече­ни, холестазе. Увеличение свободного (непрямого) били­рубина встречается при гемолитической анемии.

Уровень мочевой кислоты составляет в норме 0,12-0,24 ммоль/л. Увеличивается при подагре, приеме мочегонных средств и др.

Уровень холестерина не должен превышать 4,5 ммоль/л. Увеличение содержа­ния холестерина наблюдается при атеросклерозе, сахарном диабете и др.

Уровень триглицеридов в норме 0,55-1,7 ммоль/л. Их увеличение встречается при гепатитах, сахарном диабете и др.

Уровень глюкозы в норме (натощак) 3,5-5,7 ммоль/л. Увеличение уровня глюкозы до 6,0 и выше моль/л (гипергликемия) наблюдается в основном при сахарном диабете. Снижение уровня глюкозы (гипоглике­мия) — при заболеваниях поджелудочной железы (инсулома), гипоплазии надпочечников. Уровень глюкозы в крови может опре­деляться экспресс-методом с помощью тест-полосок, глюкометров, которые позволяют самим пациентам контроли­ровать уровень глюкозы в крови и корректировать диету и дозу сахароснижающих лекарств.

Уровень натрия, калия и хлора соответственно в пре­делах 130-156 ммоль/л; 3,4-5,3 и 97-108 ммоль/л. Уро­вень их снижается при потере воды, соли, при применении мочегонных средств.

При проведении иммунологического исследования определяется С-реактивный протеин (СРП), он встречается в острую фазу воспалительных процессов; Ревматоидный фактор (РФ) – встречается у 75% больных ревматоидным артритом. При системной красной волчанке (СКВ) обнаруживаются L-клетки.

Общие требования к технике забора крови при проведении биохимического исследования.

Места пункции:поверхностные вены локтевого сгиба, предплечья, кисти. Накануне дня исследования постовая медицинская сестра обязана осведомить больного, что процедура проводится утром натощак, объяснить больному цель и ход исследования и получить согласие.

Процедурная медсестра должна оформить направление; порядковый номер из журнала записать на направлении и нанести маркером на пробирку. Для обеспечения безопасности медицинского работника используются маска, очки, нарукавники, передник, перчатки. Необходимо наложить жгут на 10-12 см выше предполагаемого места пункции поверх салфетки или рубашки. Пунктировать вену и набрать в шприц 5-10 мл крови. Развязать жгут. Попросить больного разжать кулак, положить на место пункции шарик и быстрым движением выйти из вены. Медленно выпустить кровь из шприца по краю пробирки. Закрыть пробирку пробкой. Провести обеззараживание шприца и иглы, используя 3 емкости. Обработать дезинфектантом подушечку, жгут, фартук, нарукавники, манипуляционный стол, кушетку и другие рабочие поверхности. Штатив с пробирками поместить в контейнер. Руки вымыть под проточной водой с мылом. Уложить направление в полиэтиленовый пакет. Контейнер и отдельно полиэтиленовый пакет с направлениями доставить в лабораторию.

Взятие крови из вены на стерильность. Кровь для посева берут у постели больного либо в перевязочной стерильным шприцем, строго соблюдая все правила асептики и тут же засевают на питательные среды. Нельзя пользоваться шприцем со «стерильного стола» в перевязочной, т.к. на нем могут оказаться бактерии воздуха, по той же причине нельзя проверять проходимость иглы воздухом. Взятие крови на посев осуществляют два человека. Забор крови на посев необходимо производить во время подъема температуры в начале лихорадки. Кровь забирают из вены локтевого сгиба (из постоянного внутривенного катетера забор крови для посева недопустим) в количестве 10 мл. Помощник должен зажечь спиртовку и снять пробку с верхним слоем упаковки, а нижний слой оставить на флаконе. Флакон поднести к спиртовке так, чтобы медсестра, проведя иглу через пламя спиртовки и проколов нижний слой упаковки, выпустила кровь из шприца во флакон с питательной средой. Затем быстро обжечь место прокола упаковки и пробку и закрыть флакон. Контейнер с пробирками и отдельно полиэтиленовый пакет с направлениями направляются в бактериологическую лабораторию (при невозможности доставки флаконов с кровью в лабораторию сразу же после взятия крови их оставляют в клиническом отделении при комнатной температуре, срок хранения – 24 часа, а затем передают в лабораторию.)

При подозрении на вирусный гепатит осуществляется исследование крови на маркеры вирусного гепатита (HBS-антиген, антитела к вирусу гепатита С и т.д.). С целью исключения ВИЧ-инфицированности проводится исследование крови на ИФА (иммуноферментативный анализ). При подозрении на сифилитическое поражение, а также с профилактической целью перед оперативным вмешательством, у беременных женщин осуществляется забор крови на реакцию Вассермана.

Исследование мочи.Имеет большое диагностическое значение не только для определения функционального состояния почек, но и практически при всех заболеваниях внутренних органов. Общий кли­нический анализ мочи включает определение количества, физических свойств, химическое и микроскопическое исследование осадка.

В норме количество мочи зависит от потребляемой жидкости и состав­ляет 1,0—1,5 л/сут.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

Забор крови на анализ выполняется одноразовой иглой из вены в области локтевого сгиба или с помощью укола одноразовым ланцетом из подушечки пальца. Для того чтобы определить и подсчитать различные виды клеток, образец крови окрашивается специальными красителями и изучается в лаборатории на специальном автоматическом гематологическом анализаторе.

Неприятные ощущения сопровождают, в особенности на ранних стадиях, далеко не каждое заболевание. Боль, сигнализирующая о неблагополучии в определенной зоне нашего тела, возникает только там, где есть болевые рецепторы. Да и степень ее выраженности зачастую не совпадает с тяжестью болезни. Так, например, кариес или пульпит, хотя и причиняют невероятные страдания, не угрожают жизни. И в то же время несравненно более опасный рак желудка долгое время не дает о себе знать в связи с отсутствием в желудке болевых рецепторов. Поначалу проявлением многих недугов являются неспецифические симптомы: недомогание, слабость, повышение температуры тела, отсутствие аппетита, похудание. А на основании вовремя выполненных исследований, в том числе и анализа крови, врач сможет правильно поставить диагноз и назначить лечение. Очень важно обратиться к специалисту при первых же признаках недомогания: от этого порой зависит не только здоровье, но и жизнь.

  • Клинический. Подсчитываются клетки крови по классам (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты) и определяется процентное соотношение всех видов лейкоцитов (лейкоцитарная формула, или лейкограмма). Клинический анализ позволяет обнаружить многочисленные нарушения, которые проявляются в изменениях количественного состава или отклонениях качественных свойств компонентов крови.
  • Биохимический. В сыворотке крови определяется концентрация различных органических веществ (например, глюкозы, билирубина, железа, витаминов В12, фолиевой кислоты); клеточный состав крови при этом не исследуется.
  • Ионоселективный. Определяется концентрация электролитов крови: ионов калия, натрия, кальция, хлоридов.
  • Бактериологический. Определяется наличие в крови микроорганизмов (бактерий, вирусов), а также следов их жизнедеятельности.

Кроме того, существуют различные узкоспециальные анализы: иммунологические и гемостазиологические (свертываемость крови) исследования, тесты на определение гормонов, онкомаркеров, группы крови и ее резус-фактора и многие другие. В последнее время широкое распространение получают молекулярно-генетические исследования, позволяющие выявить наличие наследственных болезней или предрасположенность к ним.

Наряду с вышеперечисленными анализами также существует и методика определения СОЭ (скорости оседания эритроцитов). Ранее этот тест назывался РОЭ (реакция оседания эритроцитов), но затем ученые пришли к заключению, что физический процесс оседания (седиментация) реакцией не является. Вот уже около ста лет данный анализ применяется для количественного определения интенсивности разнообразных воспалительных процессов (однако место их локализации на основе теста установить нельзя).

  • инфекционные заболевания (особенно гнойные)
  • опухоли
  • нарушение обмена веществ
  • болезни почек
  • аутоиммунные заболевания (ревматоидный артрит, системная красная волчанка, ревматизм)
    тромбозы
  • цирроз печени
  • онкологические заболевания
  • некоторые непатологические состояния (например, беременность)

При этом очень важна динамика: СОЭ возрастает по мере прогрессирования воспалительного процесса. Ускоряется СОЭ и при анемии, хотя причина в данном случае другая: поскольку количество эритроцитов в крови уменьшается, «разгон» для падения у них становится больше.

В норме СОЭ составляет 1-10 мм/ч у мужчин и 2-15 мм/ч у женщин. При значительном увеличении данного показателя (до 40-50 мм/ч) необходимо немедленно начать обследование.

Кровь на анализ для определения СОЭ можно сдавать как из пальца, так и из вены. Во втором случае числовое значение обычно получается выше.

О том, что кровь способна разделяться на фракции и частично оседать на дне сосуда (теперь известно, что оседают, будучи более плотными и тяжелыми, эритроциты), знали еще древние греки. Однако первым заметил, что СОЭ изменяется у беременных, в 1918 году шведский врач Робин Фареус. Он же предложил использовать этот тест для ранней диагностики беременности: ведь УЗИ и анализов на гормоны тогда еще не существовало!

В этом разделе мы расскажем читателям об основных параметрах клинического анализа крови и поговорим о том, как расшифровать значения отдельных показателей.

Показатель Мужчины Женщины
Гемоглобин, г/л 130-160 120-140
Эритроциты, х 12 /л 4.0-5.1 3.7-4.7
Гематокрит, % 40-48 36-42
MCV, фл 80-95 80-95
MCH, пг 27-33 27-33
MCHC, г.л 30-38 30-38
RDW, % 11.5-14.5 11.5-14.5

Гемоглобин (также обозначается HGB, Нb) измеряется в г/л.

Эритроциты (также обозначаются RBC: англ, аббревиатура red blood cell count — количество красных кровяных телец) измеряются в миллионах в микролитре, или х10 12 /л.

Гематокрит (также обозначается НСТ) — показатель, свидетельствующий о том, какой объем крови занимают эритроциты; выражается в процентах. Повышается при эритроцитозах и при обезвоживании организма. Снижение гематокрита указывает на анемию либо на увеличение количества жидкой части крови.

MCV (англ, аббревиатура mean corpuscular volume) — средний объем эритроцитов; измеряется в фемтолитрах (10

15л). Увеличение объема эритроцитов (макроцитоз) свидетельствует о дефиците витамина В12 и фолиевой кислоты, а уменьшение (микроцитоз) — о нехватке железа.

МСН (англ, аббревиатура mean corpuscular hemoglobin) — среднее содержание гемоглобина в эритроците (образно выражаясь, вес начинки эритроцита); выражается в пикограммах (10

12 г). Снижение этого показателя встречается при железодефицитной анемии, а увеличение — при мегалобластной анемии (нехватке витамина В12 или фолиевой кислоты).

МСНС (англ, аббревиатура mean corpuscular hemoglobin concentration) — средняя концентрация гемоглобина в эритроците, показывающая, насколько эритроцит насыщен гемоглобином; выражается в г/л. Этот показатель бывает понижен при железодефицитных анемиях и при талассемии (врожденное заболевание крови), а повышение его практически не встречается.

RDW (англ, аббревиатура red cell distribution width) — ширина распределения эритроцитов, то есть показатель, свидетельствующий о том, насколько сильно эритроциты отличаются между собой по размерам; выражается в процентах. RDW повышена, если в крови присутствуют и крупные, и мелкие эритроциты. Это состояние называется анизоцитозом и является признаком железодефицитной и других видов анемий.

Показатель Мужчины Женщины
Лейкоциты, х109 4.0-9.0 4.0-9.0
Палочкоядерные нейтрофилы, % 1-6 1-6
Палочкоядерные нейтрофилы, х109 0.04-0.09 0.04-0.09
Сегментарные нейтрофилы, % 47-72 47-72
Сегментарные нейтрофилы, х109 2,0-7,5 2,0-7,5
Эозинофилы, % 0,5-5 0,5-5
Эозинофилы, х109 0,02-0,3 0,02-0,3
Базофилы, % 0-1 0-1
Базофилы, х109 0-0,1 0-0,1

Лейкоциты (также обозначаются WBC: англ, аббревиатура white blood cell count — количество белых кровяных телец) измеряются в тысячах в микролитре, или х109/л.

Параметры структуры лейкоцитов (палочко-ядерные и сегментоядерные нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, лимфоциты, моноциты) могут быть представлены в анализе крови в двух строках, поскольку выражаются как в процентах, так и в абсолютных числах (тысячах в одном микролитре, или х109/л). При перераспределении отдельных классов лейкоцитов различают относительное, то есть выраженное в процентах, и абсолютное увеличение (так, например, говорят об относительной и абсолютной эозинофилии или базофилии).

Показатель Мужчины Женщины
Лимфоциты, % 19-37 19-37
Лимфоциты, х109 1.5-3.5 1.5-3.5
Моноциты, % 2-10 2-10
Моноциты, х109 0,02-0,8 0,02-0,8
СОЭ, мм/ч 1-10 2-15
Ретикулоциты, % 2-15 2-15
Тромбоциты, х109 170-350 170-350

Количество лимфоцитов в различных анализах может быть представлено в виде как абсолютного числа (сколько лимфоцитов было обнаружено; обозначается LYM# или LYM), так и процентного соотношения (какой процент от общего числа лейкоцитов составляют лимфоциты; обозначается LYM% или LY%.). Увеличение количества лимфоцитов (лимфоцитоз) наблюдается при некоторых инфекционных заболеваниях (краснуха, грипп, токсоплазмоз, инфекционный мононуклеоз, вирусный гепатит и др.), а также при заболеваниях крови (хронический лимфолейкоз и др). Уменьшение числа лимфоцитов (лимфопения) встречается при тяжелых хронических заболеваниях, СПИДе, почечной недостаточности, приеме некоторых лекарств, подавляющих иммунитет (кортикостероиды и др.).

Количество моноцитов в различных анализах может быть представлено в виде как абсолютного числа (MON#), так и процентного соотношения (MON%). Увеличение количества лимфоцитов (моноцитоз) наблюдается при некоторых инфекционных заболеваниях (туберкулез, инфекционный мононуклеоз, сифилис и др.), а также при ревматоидном артрите и заболеваниях крови. Уменьшение числа лимфоцитов (моноцитопения) встречается после тяжелых операций, приема лекарств, подавляющих иммунитет (кортикостероиды и др.).

Про СОЭ (может также встречаться обозначение ESR: англ, аббревиатура erythrocyte sedimentation rate) мы уже подробно рассказывали выше.

Ретикулоциты (также обозначаются RET) — это незрелые эритроциты; измеряются в процентах. Увеличение их содержания может говорить о продолжающемся кровотечении, гемолизе (разрушении эритроцитов), служить контрольным параметром при лечении различных видов анемий.

Тромбоциты (также обозначаются PLT: англ, аббревиатура слова platelets — пластинки).

В ряде случаев, особенно при онкогематологических заболеваниях, одного только анализа крови для диагностики оказывается недостаточно. Значительно больше информации можно получить при исследовании костного мозга.

Аспирационная биопсия осуществляется в результате проведения стернальной пункции: специальной иглой выполняется прокол (пункция) грудины и путем аспирации (насасывания материала через иглу) получают жидкую фракцию костного мозга. Затем образцы его окрашиваются специальными красителями на лабораторном стекле и изучаются под микроскопом. На основе исследования костного мозга составляется заключение — миелограмма.

При трепанобиопсии гребня подвздошной кости при помощи специального инструмента (трепана) получают небольшой фрагмент («столбик») костной ткани, содержащий в себе и структуру кости, и жидкую фракцию костного мозга, после чего выполняют гистологическое исследование фрагмента. Этот метод более точен, он позволяет оценить характер изменений в костном мозге, степень угнетения кроветворения, выявить атипичные (опухолевые) клетки.

источник



Источник: art-mylife.ru


Добавить комментарий