Кровь на рнга это анализ на что

Кровь на рнга это анализ на что

Реакция непрямой гемолитической агглютинации (РНГА) относится к серологическим методам исследования. Серология – наука об изучении различных свойств плазмы крови. Если точнее говорить, то серология изучает взаимодействие антител, находящихся в организме человека, с определёнными антигенами. В медицинской клинико-лабораторной диагностики серология является одним из разделов иммунологии.

Основными серологическими методами исследования являются различные реакции. Такие реакции, как правило, делятся на прямые и косвенные. В свою очередь прямые бывают двухкомпонентными – это агглютинация, гемолитическая агглютинация или реакция преципитации. А косвенные реакции в основном трехкомпонентные, к ним относятся реакции торможения гемолитической агглютинации и нейтрализации (микроорганизма и вируса).

Агглютинация представляет собой слипание и выпадения в осадок клеток, имеющих определенный антиген, который вступил во взаимодействие с таким же антигеном. Реакция преципитации помогает определить в организме или исследуемом материале неизвестный антиген путем добавления определенного антитела. В результате при положительном результате выпадает осадок в виде хлопьев.

Такие исследования проводят для определения инфекционного или бактериологического заболевания. К сожалению, такие методы не являются однозначными в диагностики данных групп заболеваний. Поэтому при постановке диагнозов следует учитывать анамнез пациента, клинические проявления заболевания, а также назначать дополнительные подтверждающие методы исследования.

Реакция непрямой гемолитической агглютинации (РНГА) – этот метод специфичен для определения инфекционных заболеваний, вызванных бактериями (например, сальмонеллезов или дизентерии), риккетсиями, простейшими или грибами. Также этот метод эффективен в отношении диагностирования сифилиса.

При постановке реакции используются эритроциты (может использоваться латекс), которые имеют на своей стенке определенные антигены. К планшету с эритроцитами добавляется исследуемый материал. Если в нем имеются специфические антитела или белки определяемого возбудителя заболевания, то они вступают в связь с антигенами, слипаются и образуют видимый осадок.

Стандартный набор в основном содержит пустой планшет, эритроциты баранов, которые и имеют чувствительность к антигену выявляемого заболевания. Также в наборе присутствуют эритроциты, не имеющие антигенов. Контроли – положительный и отрицательный и стандартный реактив для разведения сывороток.

Самое главное в постановке реакции – это строгое соблюдение всех этапов. Для начала берут пустой планшет для РНГА, в лунки раскапываются последовательно заранее разведенные исследуемые образцы. В первую и последнюю лунки капают контроли. К сывороткам добавляют эритроциты со специфическими антигенами. Инкубируют планшет 2 часа.

Далее описывают визуальный результат. Он учитывается в крестах. Реакция считается верной только тогда, когда контроли прошли реакцию. Соответственно, в лунке с положительным контролем эритроциты располагаются по всему дну в виде хлопьев («зонтик»). В случае с отрицательным контролем на дне лунки выпадает маленькое четкое кольцо из эритроцитов («пуговка»).

Результат учитывается по интенсивности осадка из эритроцитов в лунке.

  • «-» отрицательный результат, как отрицательный контрольный образец, в виде плотного кольца на дне без какой-либо зернистости.
  • «+» слабая интенсивность реакции, кольцо на дне в виде «пуговки», но при этом видны отдельные отложения эритроцитов. Результат описывается как «сомнительный». Обязательная пересдачи крови через 2 недели.
  • «++» средняя интенсивность прошедшей реакции. Образовавшееся кольцо на дне лунки достаточно широкое с просветом в центре. Результат трактуется как слабо положительный.
  • «+++» интенсивная реакция. В лунке эритроциты занимают всю поверхность, выпадают в виде «зонтиков». То есть с тонким кольцом по периферии. Результат оценивается как положительный.
  • «++++» резкая интенсивность реакции. Вся лунка равномерно заполнена зернистыми выпадениями эритроцитов, иногда может быть в виде «зонтика». Также результат считается положительным или резко положительным.

Реакция может быть ложноположительной при протекании в организме человека тяжелых аутоиммунных заболеваний. Поэтому, если при пересдаче анализа реакция дает перекрест и результат отчитывается как ложноположительный, незамедлительно нужно обратиться к врачу для выяснения причины данной реакции.

Иногда этот метод принимают для подтверждения другого метода диагностики, основанного также на связывании антиген-антитело, называемого иммуноферментный анализ.

Чтобы не допустить ложноположительных результатов, к анализу нужно подготовиться заранее. Забор крови на данный анализ производится строго натощак и без употребления утром какой-либо жидкости. Нужно воздержаться от курения, хотя бы за час до сдачи анализа. Алкогольные напитки стоит исключить из рациона как минимум за сутки до анализа. Кровь на РНГА забирается из вены.

В настоящее время реакцию непрямой (пассивной) гемолитической агглютинации очень широко используют в медицинской лабораторной диагностике. Эта методика впервые была протестирована еще в 1965 году. И до сегодняшнего дня очень востребована. Она дает возможность не только определить, протекает ли в данный момент инфекционное заболевание у человека, но и на какой стадии оно находится.

Используют РНГА чаще всего для скрининга населения на наличие инфекционных заболеваний и для подтверждения положительных результатов, например, на сифилис. Основано это на том, что тест считается достаточно чувствительным и эффективным. Но при этом реакция проста в постановке и не требует много времени, результат можно получить уже в день сдачи крови.

Cергеева Екатерина Андреевна

Страничка оказалась полезной? Поделитесь ею в своей любимой соцсети!

источник

Многие годы безуспешно боретесь с ПАРАЗИТАМИ?

Глава Института: «Вы будете поражены, насколько просто можно избавиться от паразитов просто принимая каждый день.

При возникновении подозрения на заражение гельминтозом проводят диагностику. Наиболее популярные методы — анализ крови на паразитов, соскоб на энтеробиоз и зондирование каловых масс на яйца глистов.

В большинстве случаев анализ кала малоинформативен. Его результаты зависят не только от профессионального опыта лаборанта, но и от наличия в кале паразитарных яиц. Если яйца не отложены на момент контроля, то и паразиты не будут обнаружены, а результат будет отрицательным. Для достоверности информации кал необходимо сдать около десяти раз.

Для избавления от паразитов наши читатели успешно используют Intoxic. Видя, такую популярность этого средства мы решили предложить его и вашему вниманию.
Подробнее здесь…

Соскоб считается более надежным способом выявления паразитов, но требует перепроверки, так как тоже основан на разыскивании кладки яиц.

Наиболее точный метод определения заражения глистными инвазиями — иммуноферментный анализ крови. Это такой специализированный иммунологический тест, который путем определения в пробе крови объемного спектра антител и антигенов к различным паразитам способен диагностировать наличие или отсутствие заражения.

В иммуноферментном анализе используются фундаментальные принципы иммунологии, а это означает, что в основе анализа лежит исследование крови на присутствие в ней белков-антител (иммуноглобулинов), вырабатывающихся иммунитетом вследствие реакции на чужеродные элементы (антигены), которые тем или иным способом попадают в организм. Помимо этого, встречаясь с разнообразными инфекционными вирусами, иммуноглобулины способны их нейтрализовать.

За счет таких особенностей, кооперируясь с каким-либо антигеном, они образуют комплекс «антитело-антиген», который затем качественно и количественно определяется в иммуноферментном исследовании.

  • комфортность в работе;
  • доступная стоимость;
  • возможность исследования ранних этапов предполагаемого недуга, как у детей, так и у взрослых;
  • достаточно высокая информативность результата;
  • относительно быстрые сроки выполнения анализа;
  • возможность контроля над развитием в организме заболевания;
  • высокая степень унификации, за счет которой возможно проведение обследований в больших объемах;
  • все уровни исследования автоматизированы.

Обратите внимание! Изредка возможны неправильные результаты. Это может быть связано с ошибками техники, с приемом некоторых медикаментов, с наличием определенных хронических болезней, при которых образуются в крови иммуноглобулины, или нарушениями обмена веществ.

Следует отметить, что точность анализа обусловлена:

  • видом гельминтов;
  • скоростью размножения;
  • количеством их в организме на момент исследования.

Иммуноферментный анализ крови на паразитов способен диагностировать признаки таких паразитарных процессов, как:

  1. Аскаридоз.
  2. Лямблиоз.
  3. Амебиаз.
  4. Тениоз.
  5. Описторхоз.
  6. Фасциолез.
  7. Токсоплазмоз.
  8. Цистицеркоз.
  9. Трихинеллез.
  10. Висцеральный или кожный лейшманиоз.

При трихинеллезе кровь из вены на диагностику сдается несколько раз, так как максимальное количество антител выявляется через 5-12 недель после заражения.

В связи с тем, что расшифровка анализа формируется на нахождении антител к паразитарным антигенам, то тестирующими системами осуществляется подсчет объема антител классов IgG и IgA.

Фиксируются антитела IgM исключительно через две недели после инфицирования глистами. Вскоре после этого распознаются и антитела класса IgG, сохраняющиеся в большом количестве в процессе всего периода болезни. После элиминации гельминтов число антител резко снижается, а спустя шесть месяцев и вовсе не фиксируется в крови.

Когда выявляются антитела IgM, то это означает, что патологический процесс протекает в острой форме. Высокое число антител IgG показывает хроническую форму заболевания. Большой уровень IgM и IgG указывает на обострение болезни.

JgM JgG JgA
Отрицательный результат
Наличие иммунитета +
Острая стадия + — или + — или +
Хроническая инфекция _ — или + — или +
Обострение хронической инфекции + + +

Важно понимать, что наиболее точно расшифровать полученные результаты анализа на наличие паразитов могут доктора, ознакомленные с методами работы той лаборатории, в которой осуществлялось исследование. Ведь в каждой лаборатории, в зависимости от оборудования, могут колебаться показатели.

Чтобы правильно сдать кровь, накануне не желательно принимать жирную и очень сладкую пищу. Взятие крови рекомендовано проводить в утреннее время (натощак). В основном материал для исследования набирают из локтевой вены человека.

Анализ крови на паразитов устанавливает факт существования гельминтов или продуктов их жизнедеятельности в организме индивидуума с точностью до 90 процентов. Благодаря данному исследованию врач определяет тип глистной инвазии и по уровню антител имеет возможность отслеживать динамику патологических процессов, что эффективно влияет на динамику лечения.

Анализ на эхинококк сегодня считается самым эффективным способом определить наличие этого паразита в организме человека. Эхинококкоз считается очень опасным заболеванием, так как долгие годы может никак себя не проявлять, при этом нанося непоправимый вред человеческому организму. Ведь эхинококковые кисты зачастую поражают жизненно-важные органы.

  1. Обследование на эхинококк
  2. Когда проводится обследование
  3. Что может повлиять на результат
  4. Серологическое исследование
  5. Лабораторные анализы

Эхинококками называют ленточных червей, заражение которыми и приводит к развитию эхинококкоза. Заразиться ими человек может при контакте с больным животным. Паразиты образуют в жизненно-важных органах больного кисты.

Исходя из количества и места расположения кист, выделяют тяжесть заболевания. Проявляется эхинококкоз не сразу и может дать о себе знать спустя годы после заражения. А в это время возбудитель отравляет организм своего хозяина продуктами своей жизнедеятельности.

При контакте с возбудителем болезни в организме человека начинается выработка антител, которые можно выявить в анализе крови спустя 6-8 недель. А примерно по прошествии 3 месяцев в крови возникает максимальное количество антител. И такое количество может сохраняться достаточно долго. Иногда эхинококков удается определить во время прохождения флюорографии или рентгенографического обследования.

Но самым эффективным на сегодняшний день методом диагностики заболевания является ферментативный анализ крови. Он позволяет с высокой степенью вероятности выявить иммуноглобулин, который вырабатывается в ответ на контакт с возбудителем.

Данный анализ назначается тогда, когда появляется подозрение на заражение гельминтом. Регулярному обследованию подлежат люди определенных профессий: ветеринары, зоотехники, охотники и те, кто имеет непосредственный контакт с животными или проживает в регионах, где наблюдаются вспышки заболевания.

Заподозрить наличие паразита можно по следующим симптомам:

  1. У пациента на лицо признаки поражения внутренних органов и не удается найти конкретную причину.
  2. В случае диагностирования новообразований в легких, печени или почках.
  3. В случае возникновения аллергии, которая может свидетельствовать о наличии в организме возбудителя эхинококкоза.
  4. Когда человек находится в группе риска.

Если результат – титр менее 1:1000, то это показывает, что человек здоров. Хотя даже такой результат не дает 100% гарантии, что инвазия отсутствует. При результате более 1:1000 – можно быть уверенным в наличии червя.

Бывают случаи ложно-положительного результата обследования.

Проводя обследование на эхинококкоз, нужно понимать, что на результат оказывает влияние наличие некоторых заболеваний:

  • заражение глистными инвазиями;
  • онкологические заболевания;
  • туберкулез легких или других органов;
  • цирроз печени.

Наличие данных болезней может спровоцировать ложно — положительный результат анализа.

К другим факторам, которые способны привести к такому результату относят:

  • хилез;
  • гемолиз;
  • прохождение курса лучевой терапии;
  • прием иммунодепрессантов или цитостатиков.

Отмечено, что анализ крови на эхинококк имеет некоторые недостатки. К ним относят особенности иммунитета пациента или изменение чувствительности к образованным паразитами кистам.

Для постановки диагноза, принято учитывать целый ряд факторов (как эпизоотических, так и эпидемиологических). Сюда относят район проживания, контакт с бездомными или дикими животными, употребление в пищу некачественных или плохо приготовленных продуктов. Стоит учитывать, что заболеть при контакте с больным человеком невозможно.

Во время обследования пациента на наличие в его организме эхинококков, врач всегда учитывает возможность слабо выраженного ответа иммунной системы на наличие кист. В таких случаях эхинококк может остаться незамеченным.

Если кисты образованы в печени, то положительный результат дает 90% анализов, а при их возникновении в легких – только в 60% случаев.

Анализ проводится, когда из печени или другого органа были извлечены кисты путем операции. Обследование дает возможность проследить эффективность проведенной терапии. Если спустя 3 месяца после хирургического вмешательства анализ показал снижение количества антител, то это говорит об успешно проведенной операции. Если же количество иммуноглобулина увеличилось, то значит, произошел рецидив.

С момента заражения эхинококком до возникновения первых симптомов зачастую проходит не менее 1 года. В этот период выявить наличие возбудителя помогает серологический анализ.

  • необходимости обследовать кал на предмет эхинококка;
  • продолжительной эозинофилии;
  • мониторинге эффективности терапии;
  • анемии;
  • желчнокаменной болезни;
  • патологии желчевыводящих путей;
  • пневмонии, которую не удается вылечить стандартным лечением;
  • плохом аппетите у ребенка или плохой прибавке в весе.

Существуют лабораторные анализы, дающие возможность выявить возбудителя. Они проводятся тогда, когда нужно подтвердить диагноз или выяснить степень нарушения функционирования некоторых внутренних органов.

Чтобы подтвердить диагноз, используется реакция непрямой гемагглютинации или РСК. В первом случае выявить антитела к эхинококку и антигены помогают эритроциты, которые могут агглютинироваться при взаимодействии с генами. РСК дает возможность обнаружить определенные антитела, которые появляются в организме после заражения паразитом.

Еще одно лабораторное исследование, которое может быть назначено – проба Каццони:

  1. На предплечье делается небольшая царапина, в которую вводится жидкость из кисты.
  2. При наличии заболевания, на этом месте начнется воспалительная реакция, появится отек, гипертермия.

Выявить поражение печени помогают печеночные пробы. Для их проведения делается забор крови исключительно утром натощак.

После прохождения курса терапии, у пациента еще несколько лет будут периодически брать кровь на анализ. Считается, что на протяжении 4 лет существует высокий риск рецидива. Если же за этот период рецидива не произошло, то пациент считается полностью здоровым.

Для избавления от паразитов наши читатели успешно используют Intoxic. Видя, такую популярность этого средства мы решили предложить его и вашему вниманию.
Подробнее здесь…

Эхинококкоз является очень опасным паразитарным заболеванием, которое плохо диагностируется. Часто его удается обнаружить случайно, во время прохождения медицинского осмотра или обследования относительно другого заболевания. Поэтому так важно не игнорировать профилактические осмотры, которые дают возможность выявить заболевание на начальном этапе развития, когда оно легко поддается лечению.

Аскариды – достаточно длинные остроконечные черви круглой формы, достигающие 40 см. Такие черви чаще всего поражают брюшную полость человека: могут появиться в желчном пузыре, толстом кишечнике, аппендиксе. Заболевание аскаридами появляется через грязные овощи и фрукты, а также грязные руки, на которых могут находиться яйца паразита. Единственным источником данных гельминтов является человек. Заболевание имеет название аскаридоз. Идентифицировать данный диагноз можно с помощью сдачи анализа крови на аскариды.

  • Симптоматика
  • Диагностика
  • Как подготовиться к сдаче крови
  • Расшифровка результатов
  • Преимущества анализа крови на аскариды
  • Профилактика
  • Осложнения во время болезни
Аскарида человеческая: симптомы инвазии у детей и взрослых, способы лечения
  • Строение аскарид
  • Лечимся от аскарид при помощи таблеток
  • Аскариды в легких: симптомы, диагностика и методы лечения
  • Яйца аскариды: жизненный цикл, пути заражения и лечение
  • Для того чтобы выявить заболевание, следует знать его признаки. Больной начинает чувствовать общее недомогание, которое сопровождается такими симптомами:

    • головной болью;
    • нарушением сна;
    • быстрой утомляемостью;
    • головокружением.

    Люди, у которых паразитируют аскариды, очень быстро теряют вес. Если наблюдаются данные признаки, требуется срочно обратиться к доктору для диагностирования аскаридоза.

    Одним из методов выявления паразита в теле человека является анализ крови на аскариды. Кровь вырабатывает антитела к гельминтам.

    Применять анализ крови можно на первых стадиях аскаридоза – он будет достаточно информативным. Если наблюдается увеличенное количество лейкоцитов непонятного происхождения, то доктор выписывает анализ на присутствие антител к аскаридам. Суть данного анализа заключается в том, что в антигены аскаридоза нужной концентрации помещают кровь больного. Если в ней находятся антитела к паразитам, то они соединяются с антигенами. Такой анализ в совокупности с остальными мероприятиями являются достаточным для назначения правильного и действенного лечения.

    Для того чтобы получить достоверный результат, следует придерживаться определенных правил:

    • сдавать кровь натощак;
    • за день до сдачи принимать пищу не позднее 8 вечера;
    • из напитков разрешается пить только воду без газа.

    Принципиальное значение имеет сдача крови в утреннее время, так как биохимические показатели зависят от суточных колебаний. Женщинам в период критических дней следует воздержаться от анализа.

    Для забора крови используют венозную у взрослых и капиллярную у детей. Результаты делятся на 3 вида:

    1. Анализ крови на аскариды положительный. Это значит, что у человека находятся такие паразиты в теле или он перенес недавно аскаридоз. Так как анализ выявляет коэффициент позитивности, при рассмотрении в прогрессии можно сделать корректировку процесса лечения. Если результат оказался положительным, то пройти обследование обязана вся семья, проживающая с больным.
    2. Анализ крови на аскариды отрицательный. Может показывать отсутствие заражения или недостаточный уровень выявления антител к паразитам. Такой результат возможен на слишком ранней стадии заболевания.
    3. Анализ крови на аскариды сомнительный. Показывает присутствие антител к аскаридам приближенное к норме. В данном случае следует сдать кровь на проверку через пару недель повторно. Если результат оказался сомнительным повторно, то его можно рассматривать как отрицательный. Для повторной сдачи анализа следует обратиться в ту же лабораторию, чтобы избежать погрешности.

    Анализ крови является наиболее достоверным, но, учитывая, сколько он стоит, не каждый может себе позволить его сдать.

    Помимо сдачи крови, паразитов можно идентифицировать с помощью анализа кала, но он не всегда дает достоверный результат. Поэтому анализ крови имеет ряд достоинств по сравнению с другими видами диагностики:

    • высокая чувствительность идентификации;
    • возможность обнаружения заражения на ранних стадиях;
    • отслеживание динамики болезни и изменения способа лечения по мере надобности;
    • автоматический процесс работы, который исключает погрешности, связанные с человеческим фактором;
    • проведение массовой диагностики в короткие сроки.

    Для того чтобы избежать заболевания, проводится ряд профилактических мероприятий:

    • массовая идентификация возможных носителей паразитов. Обычно данные процедуры проводятся в школьных учреждениях и детских садах и заключаются в сборе анализов для обнаружения яиц аскарид;
    • соблюдение элементарных правил гигиены: после посещения туалета и перед приемом пищи мыть руки, перед употреблением овощей и фруктов промыть их теплой кипяченой водой, не допускать грязи под ногтевыми пластинами, менять нижнее белье ежедневно;
    • прием препаратов против паразитов для профилактики людям, живущим в местах с большим распространением заболевания;
    • обработка поверхности пола и мебели дезинфицирующими средствами.
    1. Нарушение переваривания пищи. Аскариды могут закупоривать часть кишечника, вследствие чего нарушается привычный процесс его работы.
    2. Холецистит. Развивается в случае, когда паразиты попадают в желчный пузырь, вызывая воспаление.
    3. Перитонит. Появляется при воспалении брюшной полости.

    При данном заболевании возможно самолечение, но диагностику нужно пройти обязательно. После избавления от паразитов появляется иммунитет к ним на 6 месяцев. Но бывают исключения, поэтому следует принимать все возможные меры для того, чтобы уберечься от повторного поражения.

    источник

    Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

    Серологический анализ крови представляет собой способ лабораторного исследования определенных антигенов или антител (специфических белков) в сыворотке крови пациента, основанный на иммунных реакциях организма. Данный метод применяется при диагностике инфекционных заболеваний для выявления наличия антител в крови больного к определенному виду вирусов или бактерий, а также для определения групповой принадлежности крови.

    Данный анализ не требует специальной подготовки пациента. Забор крови проводится утром натощак и, производится в процедурных кабинетах лечебных учреждений, согласно общепринятым гематологическим методикам. Для серологического исследования забор крови производится двумя методами: венозную кровь забирают из локтевой вены пациента, а капиллярную кровь – из безымянного пальца. Кровь помещают в стерильные герметичные пробирки.

    Серологические методы лабораторной диагностики используются для выявления таких заболеваний как эхинококкоз, трихинеллёз, токсокароз, описторхоз, цистицеркоз, токсоплазмоз, амебиаз, лямблиоз, для определения эффективности проведённого курса лечения и, наконец, для обнаружения повторного заболевания после полного выздоровления пациента.

    Данная реакция является непрямым вариантом серологического исследования, то есть, производится она в два этапа. На первом этапе производят выявление необходимого антитела в циркулирующем комплексе антиген – антитело с помощью антиглобулина, схожего по своей структуре с белками иммунной сыворотки. Выявление искомого антитела возможно также при изучении заранее приготовленного антигенного препарата под люминесцентным микроскопом, без использования антиглобулинов.

    Иммунофлюоресцентная реакция – очень трудоёмкий процесс, требующий от специалиста немало времени и ответственности. Начинается реакция с подготовки растворов, затем сыворотки и их контрольные образцы подвергаются титрованию (процесс, позволяющий определить содержание определённого вещества путём постепенного смешивания исследуемого раствора с контролируемым количеством реагента). Подготовленные ранее разведения и их контрольные образцы аккуратно наносятся на предметные стёкла с антигеном. Потом препараты подвергаются инкубации, затем следует их отмывание и высушивание на воздухе. На стёкла с антигеном тонким слоем наносится антисыворотка, после этого производится вторичная инкубация препаратов и, вся предыдущая цепь действий повторяется, завершаясь высушиванием препарата. В результате препарат на предметном стекле подвергается обработке глицерином и исследуется в люминесцентном микроскопе.

    Результаты проведённой реакции оцениваются по четырёх бальной шкале, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов:
    + очень слабое свечение клетки, заметное только на её периферии
    ++ слабое свечение периферии клетки, но с явно заметным зелёным оттенком
    +++/++++ яркое свечение зелёного цвета периферии клетки
    Титром реакции считается такое разведение сыворотки, где не менее 50 % клеток антигена проявляют чёткое поверхностное свечение, то есть результат реакции +++ или ++++. Значение тира реакции от 1/80 до 1/100.

    Интенсивность реакции зависит от количества осаждённых эритроцитов на дне образованных лунок:
    отрицательная реакция, которая характеризуется осаждением эритроцитов на дно лунок в виде небольшого колечка с гладкими краями или «пуговки»
    + слабая интенсивность, для данной реакции характерны небольшие одиночные отложения на дне лунки. Неагглютинированные эритроциты образовывают «маленькое колечко» в центре лунки
    ++ средняя интенсивность, ей свойственно образование на дне лунки «широкого плотного кольца» из неагглютинированных эритроцитов
    +++ интенсивная реакция, агглютинированные эритроциты образуют так называемые «зонтики», в центре которых, явно видны кольца, образованные осевшими неагглютинированными эритроцитами
    ++++ резко интенсивная реакция, в которой агглютинируются все эритроциты и, образуя «зонтики», выстилают дно лунок.
    Титром данной реакции считают последнее разведение сыворотки, при котором выявляется явная агглютинация эритроцитов не менее +++, то есть при интенсивной или резко интенсивной реакции.

    Принцип метода заключается в своеобразном взаимодействии антитела с антигеном. Одним из обязательных условий реакции является предварительная фиксация одного из её компонентов, то есть антигена или антитела, на твёрдых планшетах. Затем, при помощи ферментной метки обнаруживают возникнувшие комплексы антиген – антитело благодаря изменению оптической плотности первоначальной смеси (субстрата), что проявляется изменением интенсивности её окраски. ИФА свойственны некоторые преимущества перед остальными серологическими методами, например, данная реакция является наиболее чувствительной, в тестах используются универсальные реагенты, остающиеся стабильными не менее 6 месяцев, автоматизированный процесс учёта результатов реакции. Набор, необходимый для проведения реакции, содержит следующие компоненты: паразитарный антиген, специфические сывороточные антитела, конъюгат, планшета с зафиксированным на ней специфическим паразитарным антигеном, контрольные сыворотки.

    Постановка реакции ИФА происходит в несколько этапов: вначале производится приготовление необходимых растворов, затем готовятся исследуемые образцы сывороток, а также контрольные сыворотки, позже следует нанесение приготовленных образцов сыворотки и контрольных сывороток на твёрдофазные носители, планшеты инкубируются, промываются и, только после проведённых процедур в лунки планшет вносится конъюгат. Через некоторое время он удаляется путём промывания лунок. На завершающем этапе в лунки вносится субстратная смесь и выдерживается в тёмном месте при комнатной температуре. Оценка результатов проводится автоматически при помощи специальных измерительных приборов, в некоторых случаях допускается визуальный учёт результатов проведённой реакции.

    Достоверность и качество методов серологической диагностики зависят от организации проведённого внутреннего и внешнего лабораторного контроля, состоящих из нескольких независимых процедур, предназначенных для оценки качества результатов проведённого анализа.

    источник

    Анализ крови РПГА – одно из важнейших исследований, которое помогает определить наличие патогенных возбудителей в организме.

    Метод РПГА очень часто используется при подозрении на сифилис, инфицирование кишечного тракта, коклюш и другие опасные патологии. Когда выписывается направление на подобное исследование, пациенты интересуются, как сдают биоматериал и насколько достоверные результаты дает методика. Об этом и пойдет речь далее.

    Далеко не каждый человек знает, что это такое и как расшифровывается аббревиатура РПГА. Под этим сокращением подразумевается реакция пассивной гемагглютинации, методика нужна для определения патогенного процесса в организме.

    Этот тест выявляет антигены бледной трепонемы (люис) – патогенного микроорганизма, провоцирующего возникновение сифилиса. Если обследуемый здоров и не страдает от каких-либо хронических заболеваний, при попадании в организм бледной трепонемы иммунитет начинает активно вырабатывать антитела.

    Наличие в исследуемом биоматериале антител бледной трепонемы – основание для диагностирования сифилиса.

    Условно тестирование на сифилис можно разделить на 2 вида:

    Классификация анализа на категории зависит от вида антител, обнаруженных в полученном образце крови. Несмотря на то что впервые такой метод диагностики был проведен в 1965 году, тестирование оказалось настолько эффективным и результативным, что сегодня оно до сих пор не теряет актуальности.

    Несомненным достоинством диагностики является то, что она позволяет обнаружить инфекцию на любом этапе развития, в том числе в латентной стадии.

    Врачи советуют сдать анализ РПГА в следующих случаях:

    • у пациента проявляются клинические симптомы сифилиса (появление эрозий, язв, увеличение лимфоузлов) и регионарной лимфаденопатии; в этом случае РПГА на сифилис является незаменимым тестом, поскольку позволяет выявить болезнь на первичной, вторичной и третичной стадии;
    • возникновение признаков очаговой или диффузной алопеции;
    • если человек имел половой контакт с носителем сифилиса;
    • человек хочет стать донором, сдавать кровь и плазму;
    • РПГА входит в ежегодное профилактическое обследование, которое назначается работникам разных госучреждений;
    • при оформлении медицинской книжки;
    • при госпитализации.

    Чаще всего положительный результат теста свидетельствует о наличии сифилиса (в 70% случаев) — как врожденного, так и приобретенного, а также может говорить о таких патологиях:

    • ВИЧ-инфекция;
    • разные формы гепатита;
    • недавно перенесенный инфаркт миокарда;
    • возвратный тиф;
    • туберкулез;
    • наличие венерических заболеваний;
    • клещевой боррелиоз;
    • дифтерия;
    • диффузные заболевания соединительной ткани;
    • злоупотребление наркотическими веществами (вводимыми путем инъекций);
    • наличие воспалительного процесса в ротовой полости или в районе гениталий;
    • формирование новообразований злокачественной природы;
    • инфекционный мононуклеоз.

    Чтобы получить достоверные сведения, сдавать кровь нужно с учетом всех врачебных рекомендаций, в противном случае возбудитель сифилиса может быть не выявлен.

    Часто пациенты задаются вопросом, почему при подозрении на сифилис назначают именно РПГА. Специалисты уверяют, что тестирование является столь популярным, поскольку в 99% случаев дает правильный результат.

    Реакция агглютинации не произойдет, только если в организме отсутствуют антитела трепонемы, в противном случае обследование обязательно покажет их присутствие.

    Медицинская практика показывает, что чувствительность теста очень высока, причем положительная реакция будет выявлена даже при скрытых стадиях заболевания. Благодаря высокой результативности тест не теряет актуальности даже в настоящее время.

    Сдачу биоматериала на данное исследование часто назначают при подозрении на коклюш, на брюшной тиф, на иерсиниоз (острое инфекционное заболевание ЖКТ). Такая востребованность обусловлена тем, что по чувствительности и результативности РПГА превосходит практически все серологические анализы.

    Тест помогает определить большую часть недугов, вызванных патогенными клетками и риккетсиями. При этом в роли антигенов можно использовать ингредиенты бактериальных вакцин, бактериальные экстракты (с коревым или коклюшным диагностикумом), очищенные антигены всевозможных микроорганизмов.

    Данная методика активно используется по всему миру не только потому, что она является очень результативной, но и из-за определенных преимуществ:

    • проведение теста не представляет сложности, от пациента требуется лишь сдать кровь;
    • для проведения исследования не нужно специальное оборудование;
    • исследование не занимает много времени, обычно пациенту оглашают результат в течение 24 часов;
    • тест имеет высокую чувствительность и специфичность к сифилису.

    Для осуществления тестирование требуется венозная кровь. Чтобы расшифровка была достоверной, пациенту необходимо ответственно подойти к подготовке к анализу и строго соблюдать врачебные советы.

    Обычно специалисты рекомендуют придерживаться таких правил:

    • сдавать биологический материал разрешено только на пустой желудок;
    • перед мероприятием (если сдача крови осуществляется днем или вечером) разрешено пить только минеральную воду без газов, употреблять жидкость нужно в небольших объемах;
    • за пару часов до сдачи биоматериала запрещено курить;
    • категорически запрещено употреблять спиртные напитки за двое суток до процедуры;
    • если пациент принимает какие-либо лечебные препараты, об этом непременно нужно предупредить лечащего врача;
    • если человек чувствует себя плохо, забор крови лучше перенести на другой день, поскольку это может негативно сказаться на расшифровке результата.

    Важнейшим этапом является подбор подходящей клиники. Кровь лучше сдавать в современном диагностическом центре с хорошей репутацией.

    Точно сказать, как долго делается расшифровка результатов, невозможно. Скорость ее зависит от самого типа исследования, а также от применяемого оборудования.

    Чаще всего РПГА расшифровывается в течение суток, но в некоторых случаях процедура может занять от 2 до 4 дней. Если лаборатория будет сильно загружена, пациенту выдадут бланк с результатами не раньше чем через 5 суток.

    Чтобы выявить наличие патологии, к полученной крови нужно добавить специальную сыворотку. Если в организме человека присутствуют трепонемы, произойдет реакция агглютинации, вследствие чего эритроциты выпадут в осадок.

    Число склеенных эритроцитов во многом зависит от того, какое количество антител присутствует в реагенте. Пассивная гемагглютинация показывает не только присутствие антител, но также дает медику возможность определить их количество.

    Если тест показывает положительную реакцию, это свидетельствует о присутствии возбудителя болезни. Чтобы поставить более точный диагноз, пациента нужно направить на дополнительную лабораторную и инструментальную диагностику.

    Неотъемлемым этапом обследование является проверка всех членов семьи и людей, с которыми инфицированный человек вступал в половой контакт.

    Как показывает медицинская практика, примерно у 5% пациентов в ходе тестирования проявляется ложноположительная реакция, что может произойти при игнорировании подготовительного этапа, а также при:

    • формировании онкологических новообразований;
    • патологии соединительной ткани;
    • наличии гепатита разных форм;
    • ВИЧ-инфекции.

    Также слабоположительный результат может проявиться при беременности. Ложная “+” реакция практически всегда сопровождается низким титром. Интересным моментом является то, что если человек хотя бы раз болел сифилисом, реакция РПГА всегда будет положительной.

    Исключение составляют только те случаи, когда сифилис был выявлен на ранней стадии и после этого сразу началась интенсивная терапия.

    Тестирование дает отрицательный ответ в таких случаях:

    • у пациента в организме отсутствуют патогенные микроорганизмы, являющиеся возбудителем сифилиса;
    • с момента заражения прошло менее 3 недель, и иммунитет еще не начал производить антитела;
    • забор крови из вены производился неправильно.

    Даже если тестирование показало “-”, специалисты все же рекомендуют пройти дополнительные анализы для подстраховки, чтобы убедиться, что патогенные микроорганизмы отсутствуют.

    Многочисленные клинические исследования подтвердили, что такое эта методика дает гарантированно правильный результат, если анализ проводился при соблюдении всех правил и пациент строго придерживался врачебных рекомендаций перед забором крови.

    Если тестирование дало положительный ответ, вероятность того, что человек инфицирован сифилисом, составляет более 95%.

    Неправильная реакция может проявиться только в тех случаях, если с момента инфицирования прошло слишком мало времени либо лаборант не соблюдал инструкцию при исследовании.

    Что касается ложноположительного результата, то он может быть, если диагностика проводилась при наличии инфекционных заболеваний или патологических состояний.

    Ложный результат отличается от истинного положительного тем, что он очень быстро становится отрицательным, если тестирование провести повторно через 2 недели.

    На данный момент анализ РПГА до сих пор остается самым эффективным и достоверным тестом определения сифилиса и прочих опасных патологий. Поэтому при подозрении на наличие многих заболеваний первым делом медики направляют пациента на РПГА.

    источник

    Серологический анализ крови представляет собой способ лабораторного исследования определенных антигенов или антител (специфических белков) в сыворотке крови пациента, основанный на иммунных реакциях организма. Данный метод применяется при диагностике инфекционных заболеваний для выявления наличия антител в крови больного к определенному виду вирусов или бактерий, а также для определения групповой принадлежности крови.

    В первую очередь для проведения серологического анализа используют биологический материал, собранный от пациента:

    • сыворотка крови
    • слюна
    • фекальные массы

    В некоторых случаях исследуется материал, выделенный из определённых объектов окружающей среды: Методика проведения анализа или забора крови: Данный анализ не требует специальной подготовки пациента. Забор крови проводится утром натощак и, производится в процедурных кабинетах лечебных учреждений, согласно общепринятым гематологическим методикам. Для серологического исследования забор крови производится двумя методами: венозную кровь забирают из локтевой вены пациента, а капиллярную кровь – из безымянного пальца. Кровь помещают в стерильные герметичные пробирки.

    Особенности транспортировки крови и хранения сыворотки:

    Сразу же после забора крови её транспортируют в специальную лабораторию, где в тот же день производится подготовка сыворотки. Хранение сыворотки допускается не более 4 – 6 дней в холодильной камере при температуре 2 – 4 градусов. При необходимости более длительного хранения, сыворотка замораживается. Во избежание нарушения качества сыворотки допускается однократное её замораживание и, соответственно, размораживание. При длительном хранении антитела теряют свои свойства и становятся частично неактивными, наиболее чувствительными к замораживанию являются иммуноглобулины класса М. После размораживания сыворотки необходимо тщательное перемешивание её до однородной массы, что способствует восстановлению концентрации антител, содержащихся в данной сыворотке.

    Для чего используют серологические исследования?

    Серологические методы лабораторной диагностики используются для выявления таких заболеваний как эхинококкоз, трихинеллёз, токсокароз, описторхоз, цистицеркоз, токсоплазмоз, амебиаз, лямблиоз, для определения эффективности проведённого курса лечения и, наконец, для обнаружения повторного заболевания после полного выздоровления пациента.

    Основные методы серологической диагностики:

    1. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) Данная реакция является непрямым вариантом серологического исследования, то есть, производится она в два этапа. На первом этапе производят выявление необходимого антитела в циркулирующем комплексе антиген – антитело с помощью антиглобулина, схожего по своей структуре с белками иммунной сыворотки. Выявление искомого антитела возможно также при изучении заранее приготовленного антигенного препарата под люминесцентным микроскопом, без использования антиглобулинов.

    Иммунофлюоресцентная реакция – очень трудоёмкий процесс, требующий от специалиста немало времени и ответственности. Начинается реакция с подготовки растворов, затем сыворотки и их контрольные образцы подвергаются титрованию (процесс, позволяющий определить содержание определённого вещества путём постепенного смешивания исследуемого раствора с контролируемым количеством реагента). Подготовленные ранее разведения и их контрольные образцы аккуратно наносятся на предметные стёкла с антигеном. Потом препараты подвергаются инкубации, затем следует их отмывание и высушивание на воздухе. На стёкла с антигеном тонким слоем наносится антисыворотка, после этого производится вторичная инкубация препаратов и, вся предыдущая цепь действий повторяется, завершаясь высушиванием препарата. В результате препарат на предметном стекле подвергается обработке глицерином и исследуется в люминесцентном микроскопе.

    Результаты проведённой реакции оцениваются по четырёх бальной шкале, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов:

    + очень слабое свечение клетки, заметное только на её периферии

    ++ слабое свечение периферии клетки, но с явно заметным зелёным оттенком +++/++++ яркое свечение зелёного цвета периферии клетки Титром реакции считается такое разведение сыворотки, где не менее 50 % клеток антигена проявляют чёткое поверхностное свечение, то есть результат реакции +++ или ++++. Значение тира реакции от 1/80 до 1/100.

    2. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

    Принцип реакции основывается на способности эритроцитов концентрировать антиген на своей поверхности и склеиваться, образуя видимый осадок, при вступлении в контакт со специфическими антителами. Данная реакция очень информативна в диагностике острой формы описторхоза, острой и хронической формы эхинококкоза и трихинеллёза. Иногда РНГА используется для подтверждения результатов ИФА, что помогает повысить достоверность диагностики паразитарных заболеваний. Набор, необходимый для проведения реакции, содержит: (Д+) эритроциты барана, чувствительные к специфическому антигену, (Д-) эритроциты без антигена, (Э) сухие эритроциты барана, (К+) диагностическую агглютинирующую сыворотку – положительный контрольный тест, (К-) нормальная сыворотка человека – отрицательный тест, реагент, применяемый для подготовки раствора, используемого при разведении сыворотки. Постановка реакции происходит в несколько этапов, строго следующих один за другим. Вначале подготавливают необходимые растворы, затем готовят сыворотки и их контрольные образцы, после чего данные образцы наносятся на планшеты. Далее следует нанесение на планшеты сенсибилизированных (Д+) и несенсибилизированных (Д-) эритроцитов барана. Данные препараты инкубируются, и через некоторое время производится учёт результатов. Результаты проведённой реакции учитываются по четырёх бальной системе. Интенсивность реакции зависит от количества осаждённых эритроцитов на дне образованных лунок:

    – отрицательная реакция, которая характеризуется осаждением эритроцитов на дно лунок в виде небольшого колечка с гладкими краями или «пуговки»

    + слабая интенсивность, для данной реакции характерны небольшие одиночные отложения на дне лунки. Неагглютинированные эритроциты образовывают «маленькое колечко» в центре лунки ++ средняя интенсивность, ей свойственно образование на дне лунки «широкого плотного кольца» из неагглютинированных эритроцитов +++ интенсивная реакция, агглютинированные эритроциты образуют так называемые «зонтики», в центре которых, явно видны кольца, образованные осевшими неагглютинированными эритроцитами ++++ резко интенсивная реакция, в которой агглютинируются все эритроциты и, образуя «зонтики», выстилают дно лунок. Титром данной реакции считают последнее разведение сыворотки, при котором выявляется явная агглютинация эритроцитов не менее +++, то есть при интенсивной или резко интенсивной реакции.

    3. Иммуноферментный анализ (ИФА)

    Принцип метода заключается в своеобразном взаимодействии антитела с антигеном. Одним из обязательных условий реакции является предварительная фиксация одного из её компонентов, то есть антигена или антитела, на твёрдых планшетах. Затем, при помощи ферментной метки обнаруживают возникнувшие комплексы антиген – антитело благодаря изменению оптической плотности первоначальной смеси (субстрата), что проявляется изменением интенсивности её окраски. ИФА свойственны некоторые преимущества перед остальными серологическими методами, например, данная реакция является наиболее чувствительной, в тестах используются универсальные реагенты, остающиеся стабильными не менее 6 месяцев, автоматизированный процесс учёта результатов реакции. Набор, необходимый для проведения реакции, содержит следующие компоненты: паразитарный антиген, специфические сывороточные антитела, конъюгат, планшета с зафиксированным на ней специфическим паразитарным антигеном, контрольные сыворотки.

    Постановка реакции ИФА происходит в несколько этапов: вначале производится приготовление необходимых растворов, затем готовятся исследуемые образцы сывороток, а также контрольные сыворотки, позже следует нанесение приготовленных образцов сыворотки и контрольных сывороток на твёрдофазные носители, планшеты инкубируются, промываются и, только после проведённых процедур в лунки планшет вносится конъюгат. Через некоторое время он удаляется путём промывания лунок. На завершающем этапе в лунки вносится субстратная смесь и выдерживается в тёмном месте при комнатной температуре. Оценка результатов проводится автоматически при помощи специальных измерительных приборов, в некоторых случаях допускается визуальный учёт результатов проведённой реакции.

    Достоверность и качество методов серологической диагностики зависят от организации проведённого внутреннего и внешнего лабораторного контроля, состоящих из нескольких независимых процедур, предназначенных для оценки качества результатов проведённого анализа. Перед применением необходимо проконсультироваться со специалистом.

    Вернуться к началу страницы

    ВНИМАНИЕ! Информация, размещенная на нашем сайте, является справочной или популярной и предоставляется широкому кругу читателей для обсуждения. Назначение лекарственных средств должно проводиться только квалифицированным специалистом, на основании истории болезни и результатов диагностики.

    Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА)

    1) для обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий и других высокодисперстных веществ, риккетсий и вирусов, комплексы которых с агглютининами в обычных РА увидеть не удается,

    2) для выявления антител в сыворотках больных к этим высокодисперстным веществам и мельчайшим микроорганизмам.

    Под непрямой, или пассивной, агглютинацией понимают реакцию, в которой антитела взаимодействуют с антигенами, предварительно адсорбированными на инертных частицах (латекс, целлюлоза, полистерол, оксид бария и др. или эритроциты барана, I(0)-группы крови человека)

    В реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в качестве носителя используют эритроциты. Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок. Сенсибилизированные антигеном эритроциты используют в РПГА как эритроцитарный диагностикум для обнаружения антител (серодиагностика). Если нагрузить эритроциты антителами (эритроцитарный антительный диагностикум), то можно применять для выявления антигенов.

    Рис. 3. Схема РПГА: эритроциты (1), нагруженные антигеном (3), связываются специфическими антителами (4).

    Постановка. В лунках полистироловых планшетов готовят ряд последовательных разведений сыворотки. В предпоследнюю лунку вносят — 0,5 мл заведомо положительной сыворотки и в последнюю 0,5 мл физиологического раствора (контроли). Затем во все лунки добавляют по 0,1 мл разведенного эритроцитарного диагностикума, встряхивают и помещают в термостат на 2 ч.

    Учет. В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик), в отрицательном — оседают в виде пуговки или колечка.

    Учет результатов РНГА, поставленной с целью обнаружения ботулотоксина.

    Возбудитель ботулизма — Clostridium botulinum вырабатывает токсины семи сероваров (А, B, C, D, E, F, G), однако чаще других встречаются серовары А, В, Е. Все токсины отличаются по антигенным свойствам и могут быть дифференцированы в реакциях типоспецифическими сыворотками. Для этой цели можно поставить реакцию пассивной (непрямой) гемагглютинации с сывороткой больного, в которой предполагается наличие токсина, и эритроцитами, нагруженными антителами антитоксических противоботулинических сывороток типов А, В, Е. Контролем служит нормальная сыворотка.

    Рис. 3. Постановка и результат РНГА.

    Учет. В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик), в отрицательном — оседают в виде пуговки или колечка.

    Вывод: В сыворотке больного обнаружен ботулотоксин тип Е.

    Реакция торможения гемагглютинации (РТГА).

    Рис. 8. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) (схема).

    Принцип реакции основан на способности АТ связывать различные вирусы и нейтрализовать их, лишая возможности агглютинировать эритроциты. Визуально этот эффект и проявляется в «торможении» гемагглютинации. РТГА применяют при диагностике вирусных инфекций для выявления специфических антигемагглютининов и идентификации различных вирусов по их гемагглютининам, проявляющим свойства Аг.

    Типирование вируса проводят в реакции РТГА с набором типоспецифических сывороток. Результаты реакции учитывают по отсутствию гемагглютинации. Подтипы вируса типа А с антигенами H0N1, h2N1, h3N2, h4N2 и другие могут быть дифференцированы в РТГА с набором гомологичных типоспецифических сывороток

    Рис. 9. Результаты РТГА при типировании вируса гриппа

    Условные обозначения: — торможение гемагглютинации (пуговка) ; — гемагглютинация (зонтик).

    Выводы: Исследуемый материал содержит вирус гриппа тип А с антигеном h4N2

    Реакции преципитации (РП) основаны на фенoмене образования видимого осадка (преципитата) или общего помутнения среды после взаимодействия растворимых либо находящихся в коллоидном дисперсном состоянии Аг с АТ.РП ставят в специальных узких пробирках. В качестве реагентов используют гипериммунные преципитирующие сыворотки с высокими титрами АТ к гомологичным Аг. РП позволяет быстро (в течение нескольких секунд) выявлять незначительные количества Аг (можно выявить антиген в таких малых количествах, которые не обнаруживаются химическим путем). Они очень чувствительны, и их применяют для тонкого иммунохимического анализа, выявляющего отдельные компоненты в смеси антигена.

    Рис. 5. Схемы реакций преципитации в пробирке (А) и агаре (Б).

    Реакция кольцепреципитации Асколи

    Постановка. В узкую пробирку диаметром 0,5 см с неразведенной преципитирующей сывороткой в количестве 0,3-0,5 мл, держа ее в наклонном положении, пастеровской пипеткой медленно по стенке наслаивается такой же объем антигена. Пробирку осторожно, чтобы не смешать жидкости, ставят вертикально. При правильном наслоении преципитиногена на сыворотку четко обозначается граница между двумя слоями жидкости. Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена.

    Учет. Результаты реакции учитывают в зависимости от вида антигена и антител через 5-10 мин, 1-2 ч или через 20-24 ч. В случае положительной реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом появляется преципитат в виде кольца белого цвета.

    Рис. 4. Реакция кольцепреципитации.

    Определение токсигенности коринебактерий дифтерии в реакции преципитации в агаре.

    Эта издавна используемая реакция преципитации, предложенная для определения токсичности коринебактерий дифтерии, ставится на фосфатно-пептонном агаре в чашке Петри. Вдоль ее посередине помещают полоску стерильной фильтровальной бумаги, смоченной антитоксической сывороткой. После подсушивания на расстоянии 1 см от края полоски бляшками диаметром 10 мм подсевают выделенные культуры. В одной чашке можно сеять от 3 до 10 культур, одна из которых, контрольная, должна быть заведомо токсигенной. Посевы помещают в термостат.

    Учет реакций проводят через 24-48-72 ч. Если культура токсигенная, на некотором расстоянии от полоски бумаги возникают линии преципитата, совпадающие с линиями преципитата контрольной культуры. Они имеют вид «стрел-усиков», которые хорошо видны в проходящем свете.

    Рис. 5. Реакция преципитации в агаре.

    Реакции нейтрализации (РН) основаны на способности АТ связывать различные возбудители или их метаболиты, лишая тем самым их возможности реализовать свои биологические свойства (иными словами, АТ нейтрализуют возбудителей). На практике РН применяют для выявления вирусов и различных токсинов. В определенной степени к ним же относят реакции торможения вирусиндуцированной гемагглютинации и иммобилизации.

    Реакция нейтрализации вирусов

    В сыворотки крови переболевших лиц циркулируют антитела, нейтрализующие вирусы. Их наличие выявляют смешиванием культуры возбудителей с сывороткой с последующим введение лабораторному животному или заражением культуры клеток. На эффективность нейтрализации указывает выживание животного либо отсутствие гибели клеток в культурах.

    РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РСК)

    РСК широко используют для лабораторной диагностики венерических болезней, риккетсиозов, вирусных инфекций. Реакция протекает в две фазы. Первая фаза- взаимодействие антигена и антител при обязательном участии комплемента.

    Вторая- выявление результатов реакции при помощи индикаторной гемолитической системы (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка). Разрушение эритроцитов гемолитической сывороткой происходит только в случае присоединения комплемента к гемолитической системе. Если же комплемент адсорбировался ранее на комплексе антиген-антитело, то гемолиз эритроцитов не наступает.

    При наличии в исследуемой сыворотке антител, комплементарных антигену, образующийся комплекс антиген-антитело связывает (адсорбирует) на себе комплемент. При добавлении гемолитической системы гемолиза не происходит (задержка гемолиза), т.к. весь комплемент израсходован на специфическую связь комплекса антиген-антитело, а эритроциты остались неизменными.

    При отсутствии в сыворотке антител, комплементарных антигену, специфический комплекс антиген-антитело не образуется и комплемент остается не связанным. Поэтому при добавлении гемолитической системы комплемент присоединяется к ней. Результатом реакции в данном случае будет гемолиз эритроцитов — в пробирках образуется так называемая «лаковая» кровь.

    Рис. 6. Схема РСК: а — индикаторная система (эритроциты барана и антитела к ним) в присутствии комплемента определяется в виде гемолиза; б — с сывороткой больного диагностикум (Аг) образует иммунные комплексы и активирует комплемент, результат — задержка гемолиза; в — в сыворотке здорового человека антител нет, комплемент активируется индикаторной системой, результат — гемолиз.

    Рис. 1. Схема реакции связывания комплемента.

    Рис. 2. Постановка и результат РСК.

    Выводы: В исследуемой сыворотке выявлены антитела.

    РСК позволяет выявить антитела к любому штамму одного и того же серотипа вируса. Диагностическое значение имеет четырехкратное увеличение титра антител в парных сыворотках (в период эпидемии гриппа) и двукратное нарастание в сыворотках крови больных при характерной клинической картине.

    РЕАКЦИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ МЕЧЕННЫХ АТ И Аг

    Реакции с использованием меченных антител и антигенов составляют основу методов экспресс-диагностики инфекционных заболеваний, так как выявляют минимальное содержание Аг и АТ в исследуемых образцах. В качестве меток могут быть использованы различные ферменты, красители флюорохромы и изотопы.

    Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

    Данный метод является экспрессным и высокочувствительным. Существуют две его разновидности.

    При прямом методек исследуемой взвеси микробов, фиксированной на стекле, добавляют сыворотку, меченную флуорохромом. Образующийся комплекс антиген-антитело при освещении ультрафиолетовыми (сине-фиолетовыми) лучами дает ярко-зеленое свечение.

    При непрямом РИФиспользуют обычные диагностические сыворотки против какого-либо вида микробов. Добавление этой сыворотки к испытуемой взвеси микробов вызывает образование комплекса антиген-антитело. Этот комплекс выявляется с помощью универсальной флюоресцирующей сыворотки, содержащей антитела к гаммаглобулиновой фракции крови того вида животного, от которого была получена диагностическая сыворотка.

    Светящийся комплекс выявляют при люминесцентной микроскопии.

    Рис. 7. Реакция иммунофлюоресценции (схема).

    Рис. 4. Пневмококки, выявленные РИФ (люминесцентная микроскопия).

    Иммуноферментный анализ (ИФА)

    В основе иммуноферментного анализа лежит известная иммунная реакция антигена и антитела. Один из этих реагентов является определяемым веществом, а другой — узнающим, обладающим известной стандартной специфичностью (избирательностью) по отношению к определяемому веществу.

    Для выявления образовавшихся иммунных комплексов (антиген-антитело) используется фермент, которым предварительно метится узнающий компонент (антиген или антитело). Сам фермент, естественно, не виден, поэтому визуализация присутствия вещества, определяемого методом ИФА, достигается применением посредника -хромогена. Это особое химическое соединение, которое хорошо растворимо в воде, и раствор которого бесцветен. Превращение бесцветного хромогена в цветное вещество хромофор происходит под действием фермента, для которого хромоген является субстратом.

    Рис. 8. Иммуноферментный анализ (схема).

    Рис. 5. Иммуноферментный анализ (ИФА) (схема).

    Рис. 6. Результат ИФА. Желтый цвет раствора в лунке является положительным результатом.

    Брюшной тиф – это острое инфекционное заболевание, которое вызывается брюшнотифозной палочкой. Путь передачи – алиментарный, механизм – фекально-оральный. Возбудитель вызывает бактериемию (большое количество брюшнотифозной палочки в крови), высокую интоксикацию, поражает лимфатический аппарат тонкого кишечника, печень и селезенку (органы увеличены в размерах). Диагностический анализ на брюшной тиф первые дни болезни затруднен. Это связано с тем, что инфекционный процесс может протекать в атипичной или скрытой форме. Поэтому при любом виде лихорадки, независимо от ее интенсивности, диагностику на брюшной тиф делают 5 дней подряд.

    Инфекцию вызывает возбудитель из рода сальмонелл – Salmonella typhi. Это подвижная грамотрицательная палочка, которая живет в условиях доступа кислорода. Она не способна образовывать споры, но очень устойчива в условиях внешней среды. Находясь в воде, тифозная палочка сохраняет жизнеспособность от 1 до 5 месяцев. В испражнениях она активна на протяжении 25 дней.

    При умеренном охлаждении, например, в холодильнике, микроорганизм в молочных продуктах не только сохраняется, но и способен к размножению в течение месяца. Высокие температуры губительно воздействуют на возбудителя. При кипячении тифозная палочка погибает моментально. Если нагреть воду до 60°C, то микроорганизм погибнет через 4-5 минут. Под действием прямых солнечных лучей он также теряет жизнеспособность.

    Тифозная палочка очень чувствительна к химическим дезинфицирующим веществам. При воздействии хлорамина, сулемы, лизола она обеззараживается за несколько минут.

    Тифозная палочка имеет сложную антигенную структуру. Но для диагностических целей используют только два антигенных комплекса: О-антиген (термостабильный соматический) и Vi-антиген (термолабильный жгутиковый). Патогенный микроорганизм способен образовывать L-формы, которые способствуют развитию бактериального носительства и рецидивов брюшного тифа.

    По клинической картине брюшной тиф схож с другими инфекционными заболеваниями. Поэтому важно отличить его по проявляющимся симптомам от таких болезней, как сыпной тиф, бруцеллез, грипп, менингококковая инфекция, лихорадка КУ (коксиеллез).

    Отличительные признаки брюшного тифа:

    • острое начало болезни только в 1/3 случаев;
    • нарушение сна, слабость и головная боль нарастают постепенно;
    • кожа становится бледной и сухой;
    • заторможенность реакций;
    • интоксикация организма прогрессирует постепенно;
    • температура тела поднимается медленно, но переносится больными тяжело, при этом пациенты не потеют, кожа остается сухой;
    • сердцебиение замедляется, незначительно снижается артериальное давление, при аускультации тоны сердца приглушены;
    • появляется мягкий влажный кашель, который переходит в ранний бронхит;
    • живот вздут, слышны урчания, которые локализуются в правом подреберье (область печени).

    Для выявления брюшного тифа на ранних этапах болезни используют посев крови – анализ на гемокультуру. Это обусловлено тем, что инфекционная болезнь сопровождается интенсивной бактериемией именно первые дни заболевания, в поздний период болезни количество тифозной палочки в крови становится значительно меньше.

    Для выделения возбудителя взятую у пациента кровь засеивают на специальную питательную среду – мясопептонный бульон.

    Для исследования сдают венозную кровь из локтевой вены в количестве 10-15 мл все пациенты с высокой температурой. В некоторых случаях при подозрении на брюшной тиф посев крови могут проводить при нормальной температуре у больного. Кровь засевается сразу же после взятия и отправляется в лабораторию.

    Сколько делается анализ? Предварительные данные можно получить через двое суток. Окончательный результат известен на 4-5 сутки. Чтобы подтвердить диагноз, исследование на гемокультуру проводят 2-3 раза.

    Чтобы повысить качество посева и роста микроорганизма, за 20 минут до забора крови пациенту вводят адреналин. Посев крови должен проводиться до начала антибактериальной терапии, в противном случае результаты анализа будут недостоверными.

    Серологические исследования – это специфические методы диагностики для выявления возбудителя. Их цель – обнаружение антител в сыворотке крови. При брюшном тифе антитела вырабатываются на 6-8 день заболевания.

    Это метод определения антигенов и антител с помощью эритроцитов, которые способны выпадать в осадок в присутствие антигенов. Предварительно антитела и антигены адсорбируются и сохраняются в таком виде на поверхности эритроцитов.

    РНГА на брюшной тиф проводится в комплексной диагностике с другими тестами, при поиске источников заражения в случае вспышки заболевания. Подготовка к исследованию:

    • крови берут из локтевой вены;
    • взятие материала должно производиться натощак;
    • интервал между последним приемом пищи и сдачей крови не менее 8 часов.

    РНГА брюшнотифозной диагностики обнаруживает Vi- и О-антитела. Для положительного результата минимальные диагностические титры должны составлять для Vi-антител – 1:80, для О-антител – 1:200.

    Это метод исследования, который выявляет в сыворотке крови специфические антитела к возбудителю заболевания.

    РПГА-тест на антитела при брюшном тифе становится положительным к концу второй недели болезни. Для достоверности результатов анализ крови на брюшной тиф повторяют через 5 дней. Если инфекция носит острый характер, то титры растут.

    Кровь для РПГА на брюшной тиф берут утром натощак из локтевой вены. Положительные диагностические значения титров для Vi-антител – 1:40, для О-антител – 1:200.

    В диагностических целях могут быть использованы другие серологические методы:

    • ИФМ – иммунофлюоресцентная микроскопия;
    • ИФА – иммуноферментный анализ;
    • реакция коагглютинации.

    При брюшном тифе в обязательном порядке делают общий анализ крови. Его основные показатели:

    • лейкопения – лейкоциты в крови ниже нормы;
    • анэозинофилия – отсутствие одного из вида лейкоцитов – эозинофилов;
    • относительный лимфоцитоз – свидетельствует о снижении сопротивляемости организма;
    • повышенное или умеренное СОЭ (скорость оседания эритроцитов);
    • нейтрофильный лейкоцитоз – аномально высокое количество нейтрофилов – лейкоциты, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на острый воспалительный процесс, при брюшном тифе – это бактериемия;
    • тромбоцитопения – снижение количества тромбоцитов, отвечающих за свертываемость крови.

    Общий анализ крови берут при поступлении больного в стационар, а также несколько раз во время лечения.

    Этот метод диагностики используют не часто, так как тифозная палочка появляется в кале не ранее конца 2-й недели или начала 3-й недели болезни. В основном такой способ используют для обследования людей на носительство. Также бактериологический анализ кала на брюшной тиф делают для санкнижки работникам детских учреждений, общественного питания, водоснабжения.

    1. За 3-4 часа до взятия кала нужно принять 30 г магнезиальной соли, чтобы каловые массы сделать более мягкими.
    2. Материал для исследования нужно брать только из жидкой части.
    3. Если в кале обнаруживаются примеси крови, гноя, слизи, их обязательно собрать для анализа.
    4. Количество кала – 10-15 г, набирают деревянным или пластиковым стерильным шпателем и помещают в банку с широким горлом.

    Лучше посев производить сразу же у постели больного. Если нет возможности немедленно доставить его в лабораторию, то кал вносят в специальный консервант.

    В пробах мочи тифозная палочка обнаруживается на 3-4 неделе заболевания. Правила сбора мочи для обследования:

    • провести тщательный туалет наружных половых органов;
    • у тяжелобольных мочу собирают с помощью катетера;
    • необходимое количество мочи – 40-50 мл.

    Мочу доставляют в лабораторию. Для посева используют осадок. Чтобы его получить, материал центрифугируют, а затем засевают на плотные питательные среды.

    Чтобы получить порцию желчи для анализа, больному делают дуоденальное зондирование. Для лучшего отхождения желчи пациенту в двенадцатиперстную кишку через зонд вводят раствор магнезии объемом 40-50 мл. В пробирки собирают три порции – А, В, С, каждая объемом 5-10 мл.

    Желчь засеивают во флаконы с питательным бульоном. Если желчь содержит хлопья или другие включения, то для исследования она не пригодна. Посевы помещают в термостаты с постоянной температурой 37°C и выращивают культуру в течение 20 часов.

    Анализ на брюшной тиф с положительным результатом подтверждает наличие инфекции в организме. Отрицательные показатели говорят об отсутствии болезни или ее раннем периоде. Если результаты анализов ложноположительные, это может свидетельствовать о перекрестной реакции с другими инфекциями. Недостоверный ответ также может быть при приеме антибактериальных препаратов.

    Брюшной тиф развивается при попадании в организм бактерии сальмонеллы. Ею можно занести в кишечник через немытые продукты питания, загрязненную воду, пренебрегая правилами гигиены (например, при одновременном использовании полотенец с лицом, которое является носителем бактерии).

    Путь передачи инфекции фекально-оральный. Поскольку клиническая картина заболевания не имеет специфических симптомов, то для подтверждения диагноза необходимо провести анализ на брюшной тиф, который поможет определить присутствие в организме возбудителя.

    Анализ крови на брюшной тиф может сдаваться в двух случаях:

    • при проявлении клиники характерной для кишечной инфекции;
    • для предотвращения эпидемий (является обязательным анализом при продлении санитарной книжки).

    Если пациент обратился к доктору с жалобой на проблемы с пищеварением и гипертермией, то врач, основываясь на проявлениях болезни, сделает предположение о развитии кишечной инфекции. На присутствие брюшного тифа указывают следующие жалобы пациента:

    • боль в животе;
    • признаки отравления (тошнота, рвота, слабость, потеря аппетита, гипертермия);
    • проблемы со стулом (запор, несколько реже диарея);
    • обезвоживание (сильная жажда, язык покрыт белым налетом, шелушение кожи);
    • возможно образование розеол (сыпь на коже появляется через неделю после инфицирования. При нажатии на нее исчезает, а затем вновь появляется. Количество высыпаний от 4 до 25 элементов).

    Брюшной тиф, как правило, протекает следующим образом. Острое начало течения болезни в 30% случаев. Симптомы отравления, ухудшение сна, боль в голове, слабость усиливаются постепенно. Температура тела увеличивается на протяжении нескольких дней и достигает фебрильных значений. Появляется заторможенность реакций, живот вздут, появляется метеоризм, урчание.

    После того как человек переболел брюшным тифом у него вырабатывается стойкий иммунитет к брюшной палочке

    Возбудитель тифа в пресном водоеме может оставаться жизнеспособным до месяца, а в сельскохозяйственной продукции до 10 дней, в молочных продуктах он размножается и накапливается. Комнатная муха также способна перенести бактерию на продукты питания.

    Первые признаки заболевания проявляются на 7–23 сутки после заражения, поэтому установить точно источник крайне сложно. Брюшной тиф нужно дифференцировать от туберкулёза, бруцеллеза, сыпного тифа, холеры, чумы и прочих болезней, при которых у пациента возникает лихорадка и интоксикация.

    Для подтверждения брюшного тифа назначаются лабораторные исследования, которые нужно провести еще до начала антибиотикотерапии (прием антибактериальных лекарств может сказаться на правильности диагностики).

    Для обследования могут брать кровь, кал, мочу, желчь, спинномозговую жидкость (при подозрении на осложнение). В зависимости от стадии болезни и симптоматики могут назначать следующие анализы на брюшной тиф.

    При нем изучается плазма крови. Необходимо для обнаружения специфических антител, вырабатываемых иммунитетом человека. Анализ может проводиться только спустя 4–5 суток после заражения брюшным тифом, поскольку ранее организм не синтезирует антитела.

    Назначается для определения количественной характеристики всех клеток крови. При заражении брюшным тифом изменяются нормальные показатели крови.

    Возникает лейкопения (количество лейкоцитов понижается), анэозинофилия (отсутствуют эозинофилы), повышается количество лимфоцитов, что указывает на присутствие в крови инфекции.

    Также во время брюшного тифа увеличивается уровень нейтрофилов, лейкоцитов, синтезируемых организмом во время воспаления, понижается количество тромбоцитов, которые ответственны за свертываемость крови.

    Развернутый анализ крови проводится обязательно при поступлении на стационарное лечение и во время терапии, чтоб проследить динамику. Для исследования берут анализ крови из вены или из пальца.

    Обнаруживает белки острой фазы, проводить ее нужно еще до приема антибиотика. Для теста требуется 5–10 мл крови из вены, результаты исследования можно узнать в течение суток.

    Во взятом образце крови мало бактерий, поэтому ее переносят в питательную среду (мясопептонный бульон) и ставят в термостатический аппарат. Микроорганизм в благоприятных условиях начнет образовывать многочисленную колонию, которая будет пригодна для исследования.

    После используют химические реагенты и устанавливают вид бактерии. Подобный тест проводится всем пациентом с гипертермией, а также при проверке на брюшной тиф. Результаты можно получить на 4-5 день после проведения анализа, предварительный ответ будет дан через 2 суток. Бак посев наиболее точная лабораторная диагностика брюшного тифа.

    Для обнаружения антител к брюшному тифу применяется радиоиммунный или иммуноферментный метод

    Для обнаружения человека, который является переносчиком тифозной палочки, а также для контроля действия вакцинации против брюшного тифа применяется РНГА (реакции непрямой гемагглютинации) или пассивной гемагглютинации (РПГА). Этот метод помогает обнаружить антигены и антитела при помощи красных кровяных клеток, которые выпадают в осадок при контакте с антигеном.

    Эритроциты, на которых адсорбированы антигены, склеиваются при контакте с антителом. При иммунологическом исследовании определяется уровень этих антител. У человека, болеющего брюшным тифом, он может быть на уровне 1:40, а у победившего инфекцию 1:2000, поэтому диагностика проводится с интервалом в 5 дней, чтоб следить за динамикой.

    Данный анализ назначается редко, так как тифозная палочка выходит из организма только через 8–10 дней после заражения. Этот способ применяется для выявления людей, которые являются носителями инфекции, но сами не болеют.

    Тифозная бактерия обнаруживается в урине только спустя 1–1,5 неделю после инфицирования. Анализ мочи может указать на такие косвенные доказательства брюшного тифа, как лейкоцитоз (на начальном этапе болезни количество белых кровяных клеток повышается, а в течение 7 дней резко падает), лейкопению, повышенное СОЭ, анэозинофилию, относительный лимфоцитоз.

    Перед сбором мочи пациент должен провести гигиену наружных половых органов, затем собрать материал для анализа в стерильную баночку. Для диагностики будет достаточно 40–50 мл мочи. Для обследования на инфекцию используют осадок, который переносят на плотную питательную среду.

    Возможность обнаружения возбудителя брюшного тифа микробиологическими методами напрямую связана с количеством бактерий в биологической жидкости и применением антибактериальной терапии. Через неделю после заражения сальмонеллой S. Typhi серологические агглютинационные тесты (РПГА на брюшной тиф) дают положительный ответ.

    Серологические тесты менее специфичны, чем бактериологические методы, так как положительный ответ может свидетельствовать о перенесенной инфекции, вызванной другим видом сальмонелл. Дополнительное исследование через пять дней помогает следить за ростом титр, который характерен для острой инфекции.

    Бактерии в крови находят только у заболевших людей, в моче и кале палочка может быть как у больного человека, так и у бактерионосителя

    Анализ крови на брюшной тиф должны сдавать не только пациенты с характерными признаками заболевания, но и те, кто при работе сталкивается с большим количеством людей или продуктами питания. Делается это с целью профилактики распространения брюшного тифа, поскольку заразившийся человек способен длительное время быть разносчиком инфекции.

    Наибольшее количество бактерий больной выделяет с фекалиями в период с первой до пятой недели заболевания, а с мочой в течение 2–4 недель. Каждый десятый перенесший инфекцию выделяет тифозную палочку во внешнюю среду на протяжении 3 месяцев, а 3–5% от всего количества больных тифом являются хроническими носителями инфекции, распространяя палочку в течение нескольких лет.

    При прохождении и продлении санкнижки анализ на брюшной тиф является обязательным. Многие не знают, откуда кровь берут для проверки. Для проведения диагностики у пациента осуществляется забор венозной крови из области сгиба локтя.

    Исследование проводится инвитро, что в дословном переводе означает «в пробирке». Сколько времени делается тест зависит от загруженности лаборатории, как минимум результат будет готов через два дня. Как правильно сдавать анализ на брюшной тиф уточнит доктор, выписывающий направление.

    Если уточнений нет, то следует придерживаться следующих рекомендаций:

    • сдавать нужно кровь натощак;
    • за день до проведения нельзя есть слишком острую, соленую, жирную или копченую пищу;
    • необходимо исключить прием слабых и крепких алкогольных напитков, медикаментов как минимум за три дня до сдачи крови;
    • питьевой режим менять не требуется, но от кофе все же лучше отказаться;
    • за час до анализа не разрешается курить.

    Чтобы избежать ложноположительного или ложноотрицательного анализа нужно ответственно подойти к сдаче крови

    Если антитела к брюшному тифу не обнаружены, то это подтверждение того, что человек не является разносчиком инфекции. Если же присутствуют симптомы заболевания, а тест не показал наличие специфического белка, то, возможно, что иммунный ответ еще не сформирован, так как патология на ранней стадии.

    Положительный результат указывает на то, что пациент болеет брюшным тифом или является бактерионосителем.

    Ложноположительный результат анализа возможен если в организме присутствует бактерия из рода сальмонелл, но вызывает другое заболевание, то есть микроорганизм есть и иммунитет реагирует выработкой антител. Какие анализы сдать при предполагаемом брюшном тифе или при проверке на бактерионосительство, а также где лучше сдать биологический материал, укажет врач.

    Если брюшной тиф протекает в острой форме, то больной будет госпитализирован в инфекционную больницу. Пациенту назначаются антибиотики, диета и постельный режим. Избегать рекомендуется любого перенапряжения, даже при посещении уборной. Брюшной тиф, при отсутствии адекватного лечения, может привести к токсическому шоку, перфорации слизистой кишечника. Терапия длится от 2 до 4 недель.

    источник

    8



    Источник: domofoniya.com


    Добавить комментарий