Иммунофенотипирование лимфоцитов крови что это за анализ

Иммунофенотипирование лимфоцитов крови что это за анализ

/л.


Гранулоциты, % от общего числа лейкоцитов
и абсолютное количество клеток в единице объёма:

Моноциты, % от общего числа лейкоцитов и абсолютное количество клеток в единице объёма:

Единицы измерения: %, клеток х 106/л.
Референсные значения

Возраст
%
Абс. кол-во, клеток х 106
1 мес. — 2 года 3 — 8 270 — 1100
 > 2 лет 2 — 7 0 — 800

Фенотипирование лимфоцитов (субпопуляции). Лимфоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. Кластеры – это антигены на поверхности клеток, маркёры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов — CD (cluster of differentiation antigens) изучены и стандартизованы, им присвоены определённые номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определёнными CD, можно произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям. Это позволяет понять природу некоторых заболеваний, оценить состояние пациента, прогнозировать его дальнейшее развитие, проследить за течением болезни.

Основные субпопуляции лимфоцитов: Т-лимфоциты – лимфоциты, созревание которых происходит в тимусе (отсюда их название). Они контролируют работу В-лимфоцитов, ответственных за образование антител, т. е. за гуморальный иммунный ответ. Т-хелперы (от англ. to helh – помогать) – разновидность Т-лимфоцитов, помогающих синтезу антител. Цитотоксические Т-клетки — распознают фрагменты антигена, на поверхности клеток-мишеней, ориентируют свои гранулы по направлению к мишени и высвобождают их содержимое в области контакта с ней. При этом некоторые цитокины являются сигналом гибели (по типу апоптоза) для клеток-мишеней.

В-лимфоциты (от лат. «bursa» — сумка по названию сумки Фабрициуса, в которой созревают эти лимфоциты у птиц) проходят развитие в лимфоузлах и других периферических органах лимфоидной системы. На поверхности эти клетки несут иммуноглобулины, функционирующие как рецепторы к антигенам. В ответ на взаимодействие с антигеном В-лимфоциты отвечают делением и дифференциацией в плазматические клетки, вырабатывающие антитела, посредством которых обеспечивается гуморальный иммунитет.

ЕК-клетки (естественные клетки-киллеры) или натуральные киллеры-клетки с естественной, неиммунной цитотоксической активностью к неопластически изменённым клеткам-мишеням, которые не относятся ни к зрелым Т- или В-лимфоцитам, ни к моноцитам. EKT- клетки – клетки с естественной неиммунной киллерной активностью, имеющие признаки Т-лимфоцитов.

Кластеры дифференциации (СД) антигенов. Это маркёры, по которым одни клетки отличаются от других.

CD3 (T3; Leu-4) – поверхностный маркёр, специфичный для всех клеток субпопуляции Т-лимфоцитов. По функциям относится к семейству белков, формирующих комплекс мембранной передачи сигнала, связанный с Т-клеточным рецептором.
CD4 (T4; Leu-3) – характерен для хелперных Т-клеток; представлен также на моноцитах, макрофагах, дендритных клетках. Он связывается с молекулами MHC класса II, экспрессированными на антигенпрезентирующих клетках, облегчая распознавание пептидных антигенов.
CD8 (Leu-2; T8; Lyt2/3) – характерен для супрессорных и/или цитотоксических Т-клеток, ЕК-клеток, большей части тимоцитов. Это рецептор Т-клеточной активации, облегчает распознавание клеточно-связанных антигенов MHC класса I.
CD16 (FcRIII) – используется вместе с CD56 преимущественно для идентификации ЕК-клеток. Представлен также на макрофагах, тучных клетках, нейтрофилах, некоторых Т-клетках. Это компонент рецепторов, связанных с IgG, опосредующих фагоцитоз, продукцию цитокинов и антителозависимую клеточную цитотоксичность.
CD19 (B4) – присутствует на B-клетках, их предшественниках, фолликулярных дендритных клетках, считается самым ранним маркёром B-клеточной дифференциации. Регулирует развитие, дифференциацию и активацию B-клеток.
CD56 (neural cell adhesion molecule-1, NCAM; NKH1) – прототипный маркёр ЕК-клеток. Помимо ЕК-клеток присутствует на эмбриональных клетках, мышечных, нервных, эпителиальных клетках, некоторых активированных Т-клетках. CD56-позитивны такие гематологические опухоли как ЕК-клеточная или Т-клеточная лимфома, анапластическая крупноклеточная лимфома, плазмоклеточная миелома (плазмоклеточная лейкемия CD56-негативна). Это молекулы адгезии клеточной поверхности, которые облегчают гомофильную адгезию и участвуют в контактном ингибировании роста, ЕК-клеточной цитотоксичности, развитии нервных клеток.
CD3+HLA-DR+ клетки представляют собой зрелые активированные Т-лимфоциты человека. HLA-DR – это один из антигенов MHC класса II.
CD69 (activation inducer molecule, AIM; Early activation antigen, EA-1; MLR-3; Leu-23) – ранний маркёр активации, трансмембранный белок типа I. Вовлечен в ранние механизмы активации Т-клеток, ЕК-клеток, моноцитов и тромбоцитов. Формирует димеры, которые могут функционировать как трансдуктор сигнала, усиливая клеточную активацию. Экспрессируется в повышенных количествах на Т-клетках из воспалительных инфильтратов при ревматоидном артрите, вирусных гепатитах, аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы. CD69 позитивен при ангиоиммунобластной лимфоме, лимфоме Леннерта, грибовидном микозе и\или синдроме Сезари и т.д.

Форма представления результатов иммунофенотипирования лимфоцитов

Возраст % от общего количества
лимфоцитов
Абсолютное количество
клеток х106
CD3 (Т-лимфоциты)
55 — 78 2070 — 6540
3 мес. — 1 год 45 — 79 2280 — 6450
1 — 2 года 53 — 81 1460 — 5440
2 — 6 лет 62 — 80 1610 — 4230
6 — 16 лет 66 — 76 1400 — 2000
> 16 лет 55 — 80 800 — 2200
CD3+ CD4+ (Т-хелперы)
41 — 64 1460 — 5116
3 мес. — 1 год 36 — 61 690 — 4600
1 — 2 года 31 — 54 1020 — 3600
2 — 6 лет 35 — 51 900 — 2860
6 — 16 лет 33 — 41 700 — 1100
> 16 лет 31 — 49 600 — 1600
CD3+ CD8+ (Т-цитотоксические лимфоциты)
16 — 35 650 — 2450
3 мес. — 1 год 16 — 34 720 — 2490
1 — 2 года 16 — 38 570 — 2230
2 — 6 лет 22 — 38 630 — 1910
6 — 16 лет 27 — 35 600 — 900
> 16 лет 12 — 30 190 — 650
CD19 (В-лимфоциты)
19 — 31 500 — 1500
2 — 6 лет 21 — 28 700 — 1300
6 — 16 лет 12 — 22 300 — 500
> 16 лет 5 — 19 100 — 500
CD3-CD16+CD56+ (ЕК-клетки)
1 мес. — 4 мес. 2 — 14
4 мес. — 1 год 2 — 13
1 — 2 года 3 — 16
2 — 6 лет 4 — 23
6 — 12 лет 4 — 26
4 — 16 лет 6 — 27
> 16 лет 6 — 20
1 мес. — 2 года 40 — 915
2 — 9 лет 96 — 1330
9 — 16 лет 100 — 500
> 16 лет 150 — 600
> 1 мес.
CD3+CD16+CD56+ (ЕКТ-клетки)
> 1 мес.
CD3+/HLA-DR (зрелые активированные T-лимфоциты)
1 мес. — 4 мес. 1 — 9
4 мес. — 1 год 1 — 7
1 — 2 года 3 — 12
2 — 6 лет 3 — 13
6 — 9 лет 1 — 8
9 — 12 лет 3 — 14
12 — 16 лет 1 — 8
> 16 лет
CD3+/HLA-DR+ (активированные CD3-, не относящиеся Т-лимфоцитам)
> 1 мес. 5 — 20 60 — 600

Фагоцитарная активность лейкоцитов. Данные по фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов (содержание клеток, фагоцитировавших бактерии с флюоресцентной меткой при инкубации) позволяют оценить резервные возможности этих клеток по поглощению и перевариванию чужеродных агентов.

Форма представления результатов

  • Фагоцитирующие гранулоциты (из общего числа гранулоцитов). Единицы измерения: %. Референсные значения: 82 — 90.
  • Фагоцитирующие моноциты (из общего числа моноцитов). Единицы измерения: %. Референсные значения: 75 — 85.

Способность лимфоцитов к активации

Для определения функционального состояния Т-лимфоцитов исследуют способность этих клеток размножаться в ответ на введение митогенов — веществ, стимулирующих размножение, а также синтез антител.К таким веществам относится ФГА (фитогемагглютинин). Его получают из растений (семян фасоли). Лейкоциты выделяют центрифугированием, и они оседают слоями в зависимости от массы. Затем их культивируют в течение трёх суток в присутствие ФГА. Затем определяют количество молодых клеток (бластов) по отношению ко всем лимфоцитам. Один из признаков активации – появление антигена ранней активации CD69. Принцип метода – подсчёт клеток, экспрессирующих антиген ранней активации CD69 в ответ на инкубацию в присутствии с ФГА. Результат очень зависит от качества реактивов и других условий. Поэтому исследование необходимо проводить в одной и той же лаборатории. 

Форма представления результата:

  • Активированные Т-лимфоциты (CD3+CD69+) после инкубации с ФГА. Единицы измерения: %. Референсные значения: 50 -69.
  • Активированные CD3- лимфоциты (CD3-CD69+) — не относящиеся к Т-лимфоцитам клетки — преимущественно ЕК клетки и B-лимфоциты, после инкубации с ФГА. Единицы измерения: %. Референсные значения: 15 — 34.

Снижение ответа: наличие иммунодефицита.

Повышение ответа:

  1. инфекция;
  2. аутоиммунная патология.

Циркулирующие иммунные комплексы общие (ЦИК)
Одновременное присутствие высоких концентраций антигенов и их специфических антител может вести к образованию циркулирующих иммунных комплексов. Иммунные комплексы могут выходить из кровотока в мелких сосудах и откладываться в тканях, например, в гломерулах почек, в лёгких, коже, суставах, стенке сосудов. ЦИК обладают способностью связывать и активировать комплемент, что ведёт к повреждению ткани. Повышение уровня ЦИК может наблюдаться при аутоиммунных заболеваниях, хронических инфекционных заболеваниях, при которых постоянная продукция антигена инфекционным агентом сочетается с иммунным ответом на него (хронические гепатиты). Клинически это часто проявляется гломерулонефритами, артритами, нейропатиями. Несмотря на непосредственную роль в патогенезе некоторых заболеваний, определение ЦИК не всегда информативно, поскольку количество иммунных комплексов, отложившихся в тканях более важно, чем количество комплексов, циркулирующих в крови.

Исследование ЦИК может быть недостаточно чувствительным и специфичным в диагностике болезней, вызываемых иммунными комплексами, и должно дополняться исследованием эффектов ЦИК на функцию органов (например, концентрация креатинина и анализ мочи), а также определением С3 С4 компонентов комплемента (см. тест № 193), количество которых снижается вследствие усиленного потребления.

Иммуноглобулины IgG, IgA, IgM, IgE (см.тесты №№ 45, 46, 47, 67). Данные иммунологического исследования интерпретирует врач в комплексе со всеми клинико-анамнестическими данными конкретного пациента. При оценке иммунного статуса пациента результаты исследования оцениваются с точки зрения природы и стадии патологического процесса, сопутствующих заболеваний, приёма лекарственных препаратов и пр. При этом важны не только абсолютные значения отдельных показателей, но и их соотношение и динамика показателей.



Источник: www.invitro.ua


Добавить комментарий