Анализ крови нормы иммунологический

Анализ крови нормы иммунологический

Иммунохимический анализ крови назначается не так часто, как общий или клинический, поэтому не все знают, что он собой представляет. Иммунохимический анализ включает в себя множество показателей, которые позволяют оценить иммунную реакцию организма и определить гормональный фон. Это комплексный анализ, он считается более сложным и дорогостоящим, но очень точным в плане определения сопротивляемости организма тому или иному заболеванию.

Иммунологический анализ — эффективная диагностика состояния иммунитета

Иммунохимический анализ крови включает в себя определение как уровня иммуноглобулинов, так и уровня репродуктивных гормонов. Гормональный и иммуноферментный анализы позволяют оценить состояние организма, его репродуктивную и защитную функцию.

Иммунохимический анализ крови не самый дешевый, но довольно точный анализ. С его помощью можно поставить окончательный диагноз без дальнейшего обследования. ИФА (иммуноферментный анализ) определяет соотношения «антиген-антитело», то есть показывает количество антител, реагирующих на те или иные антигены. Это один из самых информативных анализов для определения инфекционных заболеваний.

К преимуществам иммунохимического анализа можно отнести доступность. Пройти этот тест можно в любой медицинской лаборатории, частной или муниципальной. Полный анализ проводится нечасто, обычно указываются, какие именно показатели нужно определить (гормоны, антитела к конкретным антигенам, лейкоциты, способные к фагоцитозу и т.д.). С помощью этого теста можно определить множество заболеваний, например, анемию, онкологию, гормональный сбой, бесплодие, инфекцию, сахарный диабет и т.д.

Иммунохимический анализ редко сдается для профилактики, чаще врач рекомендует его при наличии определенных показаний:

  1. Подозрение на наследственные нарушения иммунитета. Любые нарушения, связанные с иммунной реакцией организма, можно выявить с помощью этого анализа. Обычно иммунные нарушения приводят к иммунодефициту, причины которого определить трудно. Подобные патологии нередко передаются по наследству и проявляются в определенном возрасте.
  2. Подозрения на онкологические заболевания. В число показателей иммунохимического анализа входят и онкомаркеры. Однако они определяют не только наличие злокачественной опухоли, но и предрасположенность к онкологии в процентном соотношении.
  3. Проблемы с зачатием. Пары, которые не могут забеременеть в течение года или больше, сдают анализ на половые гормоны для определения проблем и совместимости.
  4. Аутоиммунные заболевания. Аутоиммунные заболевания связаны с нарушением работы иммунитета, который атакует организм, а не возбудителя заболевания. Эти нарушения также выявляются с помощью иммунохимического анализа.

Анализ базируется на специфическом взаимодействии антигенов и антител

Поскольку иммунохимический анализ представляет собой целый комплекс тестов, список входящих в него показателей довольно широк.

Чаще всего проводят именно ИФА и гормональное обследование, поэтому к основным показателям можно отнести половые гормоны и различные классы иммуноглобулинов:

  • IgA. Иммуноглобулин, который отвечает за защитные функции слизистых оболочек легких, бронхов, ЖКТ, почек, мочевого пузыря, мочеточников. На острой стадии в крови не определяется, появляется со 2 недели течения инфекции. На более поздних сроках указывает на хроническую форму заболевания.
  • IgE. Этот иммуноглобулин позволяет определить аллергические реакции и паразитарные инфекции. Однако при некоторых инфекциях и видах аллергий уровень иммуноглобулина Е остается на прежнем уровне, поэтому требуется дополнительное обследование.
  • IgM. Иммуноглобулин острого периода болезни. Он появляется в крови первым, уже на 5-ый день после попадания возбудителя в организм. Держится в крови около полутора месяцев, зачем исчезает.
  • IgG. Иммуноглобулин, который считается остаточным и указывает на наличие иммунитета к тому или иному заболеванию. Начинает появляться в крови примерно через месяц после начала болезни. Эти иммуноглобулины могут оставаться в крови годами или же в течение всей жизни, но о наличии самого заболевания не сигнализируют.
  • IgD. Иммуноглобулин, который в небольших количествах содержится у всех людей. Может быть показателем как иммунодефицитных заболеваний, так и физиологических состояний.
  • Лютеотропин. Гормон гипофиза, который регулирует работу половых желез. От его выработки зависит уровень других половых гормонов, таких, как прогестерон, эстроген и тестостерон. У женщин этот гормон регулирует менструальный цикл.
  • Пролактин. Гормон, поддерживающий лактацию, начинает вырабатываться во время беременности. В больших количествах тормозит выработку других половых гормонов.
  • Эстрадиол. Наиболее активный женский половой гормон, отвечающий за развитие вторичных половых признаков, менструальный цикл, созревание яйцеклетки.

Процедура забора крови на иммунологическое исследование

Процедура забора крови на иммунохимический анализ стандартная. У пациента берется кровь из вены. Она обследуется с помощью специального лабораторного анализатора. Современное оборудование позволяет получить результат уже через 10-20 минут. Большинство лабораторий предоставляют результат через 1-2 дня после сдачи крови.

Никакой сложной и длительной подготовки к сдаче крови не требуется, но есть некоторые стандартные правила, которые рекомендуется соблюдать, чтобы получить максимально достоверный результат. Кровь сдается только утром на голодный желудок. С утра можно выпить чистой негазированной воды, но завтракать нельзя. Последний прием пищи рекомендуется не позже 10 часов вечера накануне обследования.

Несмотря на то, что никакие печеночные и иные пробы в этот анализ не входят, за 2 дня до обследования рекомендуется воздержаться от жирной пищи и большого количества белка. Белок и жир повышают свертываемость крови и делают сыворотку мутной, что может нарушить процесс обследования материала.

Перед сдачей крови за 2-3 дня нельзя принимать алкогольные напитки — алкоголь влияет на многие показатели крови, включая гормоны.

За сутки до сдачи крови нежелательно курить. Это правило соблюдается редко, поэтому врачи рекомендуют не курить хотя бы непосредственно перед посещением лаборатории, за пару часов. Женщины должны сообщать врачу о фазе менструального цикла. От того, в какую фазу сдается анализ, зависит уровень половых гормонов, так как у женщин они меняются с течением цикла. Во время беременности учитывается срок и триместр.

Больше информации о том, что такое иммуноглобулины можно узнать из видео:

источник

Код исследования: В69

Определение свободных легких цепей иммуноглобулинов (капа и лямбда) в сыворотке крови и в суточной моче (выявление белка Бенс-Джонса) – показатель в диагностике множественной миеломы (болезнь Рустицкого-Калера, миеломная болезнь). Основные показания к применению (c учетом клинической картины заболевания): боли в костях, патологические переломы, анемия, полинейропатия, неясные лихорадки, гиперкальциемия, протеинурия, изменения картины электрофореза белков.

Множественная миелома – это злокачественное заболевание плазматических клеток в результате их злокачественной пролиферации, происходящей главным образом в костном мозге, но иногда и в экстрамедуллярных очагах. Относится к гематоонкологическим заболеваниям. Поражаемые клетки – это плазматические клетки, являющиеся разновидностью лейкоцитов, которые вырабатывают в нашем организме иммуноглобулины (антитела). Плазматические клетки — разновидность клеток соединительной и кроветворной тканей; образуются у позвоночных животных и человека из стволовых кроветворных клеток костного мозга, являются конечным этапом развития B-лимфоцита. Основная функция – выработка антител. Каждый плазмоцит секретирует иммуноглобулины только одного класса.

Термин «миелома» впервые был предложен в 1873 году Рустицким для обозначения опухоли, развивающейся множественно в костном мозге. В 1900 г. Райт обратил внимание на связь этой болезни с поражением плазматических клеток.

Миелому обычно называют «множественной миеломой», поскольку в костях обнаруживают сразу несколько очагов или участков образования опухолей. Единичная опухоль из миеломных клеток называется изолированной плазмацитомой.

Опухолевая ткань разрастается преимущественно в плоских костях — череп, рёбра, таз и в позвоночнике, приводя к остеолизису и остеопорозу. Множественная миелома может проявляться патологическими переломами, болями в костях, анемией, снижением гемоглобина, тромбозами, кровотечениями. При разрушении костей в крови увеличивается содержания кальция , который в виде конкрементов откладывается в почках, лёгких. Миеломная нефропатия в основном обусловлена поступлением через почечный фильтр парапротеинов. Характерным для миеломной болезни является частота бактериальных инфекций вследствие уменьшения количества нормальных иммуноглобулинов и нарушения образования антител.
Иммуноглобулины разных классов (G, A, M, D, E) характеризуются общим строением. Легкие L-цепи одинаковы у всех иммуноглобулинов, тогда как тяжелые Н-цепи гетерогенны. Молекула иммуноглобулина содержит две легкие и две тяжелые цепи. Легкие цепи существуют в двух формах: каппа-цепи и лямбда-цепи.

От типа тяжелых цепей зависит принадлежность молекулы иммуноглобулина к тому или иному классу иммуноглобулинов.

Вырабатываемые пораженными клетками антитела различных видов в избыточных количествах, легкие и тяжелые цепи иммуноглобулинов принято называть парапротеинами. Их можно обнаружить в крови или в моче методом электроиммунофореза. Легкие цепи способны проходить через почечный фильтр и поэтому их находят в моче. Лёгкие цепи иммуноглобулинов, обнаруживаемые в моче или в крови называются — белок Бенс-Джонса. Белок Бенс-Джонса, примерно в 60% случаев, выявляют чаще в моче больных множественной миеломой. Чаще легкие цепи обнаруживаются в моче за счет концентрирующего эффекта и реже, в крови. Считается, что при доброкачественных парапротеинемиях белок Бенс-Джонса не выявляется, поэтому его определение используют как скрининговое исследование при подозрении на миелому.

Следует учитывать, термин — «белок Бенс-Джонса» не всегда можно отнести к наличию легких цепей. Поскольку, даже при наличии в моче легких цепей только в 10% случаев их поведение соответствует тому эффекту, который показал автор (преципитация и растворение при нагревании и охлаждении мочи). Для определения белка Бенс-Джонса применяют нагревание мочи. При 56° С белки преципитируют, а при точке близкой к кипению вновь растворяются.

По иммунохимической классификации выделяют 5 основных типов миеломы: G, A, D, Е и Бенс-Джонса (обнаруживаются только легкие цепи – «болезнь легких цепей»). К редким формам относятся несекретирующая миелома (1-3%), М-миелома, биклональная миелома (2-4%). Частота встречаемости типов миеломы примерно соответствует концентрации различных классов иммуноглобулинов в сыворотке крови: G-миелома обнаруживается в среднем в 60% случаев, А-миелома — в 25%, D-миелома — в 1%, Е- миелома 1%. М-миелома и несекретирующая форма встречаются очень редко. Чаще встречаются G- и A-миелома, миелома Бенс-Джонса (15-20%). При несекретирующей миеломе для диагностики используют определение бета-2-микроглобулина.
Легкие цепи каппа и лямбда в молекуле парапротеинов распределяются приблизительно равномерно, как и при парапротеинемии Бенс-Джонса, при D-миеломе обычно обнаруживают лямбда-цепи.

У части пациентов миеломные клетки продуцируют только легкие цепи и не продуцируют тяжелых цепей. В этом случае говорят о болезни легких цепей или миеломе Бенс-Джонса. Эти цепи обнаруживаются в моче при отсутствии патологических иммуноглобулинов в сыворотке крови. Примерно у 30% больных обнаруживаются легкие цепи в моче — легкие цепи каппа. Обнаружение белка Бенс-Джонса, типа лямбда является худшим прогностическим признаком, поскольку этот белок более нефротоксичен (приводит к развитию почечной недостаточности) чем белок каппа.

Следует учитывать, что обнаружение парапротеинов увеличивается после 50 лет и достигает 4-7 % у лиц старше 65 лет (моноклональная гаммапатия невыясненного значения). Этот термин указывает на случаи парапротеинемии без других признаков плазмаклеточного или онкогематологического заболевания.

Таким образом, при ряде заболеваний в сыворотке крови появляется большее количество какого либо из класса иммуноглобулинов (их еще называют парапротеины) на фоне присутствия и других видов иммуноглобулинов. При электрофорезе сыворотки,которая содержит нормальные иммуноглобулины, их миграция идет в виде широкой, размытой полосы, а моноклональные (парапротеины) — проявляются в виде более узкой и четко очерченной. Моноклональные иммуноглобулины в силу своей однородности мигрируют при электрофорезе с образованием четко сформированной полосы, которую называют М-градиент.

Материал: Cыворотка крови, суточная моча.

Метод: Иммунофиксации в агарозном геле.

Тест – система: HELLABIO.

Референсные значения (норма): Не обнаружено.

Основные показания к назначению анализа:
1. Диагностика миеломной болезни;
2. Макроглобулинемия Вандельстрема;
3. Амилаидоз;
4. Болезнь тяжелых цепей.

Понижение значения:
1. Свидетельствует об эффективности терапии.

источник

Прямыми показаниями к иммунохимическому исследованию принято считать клинические и лабораторные признаки, которые могут быть проявлением как непосредственно В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний (в первую очередь парапротеинемических гемобластозов), так и связанной с ними белковой патологии.

Один из самых частых лабораторных признаков, заставляющих предположить наличие парапротеинемии, — повышение СОЭ (особенно не связанное с реактивными состояниями и другими очевидными причинами), которое в данном случае является результатом увеличения глобулиновой фракции сыворотки крови за счет моноклонального иммуноглобулина. Следует отметить, что белок Бенс-Джонса, который является микроглобулином, не отражается на уровне СОЭ, что в части случаев вызывает диагностические затруднения и неоправданный отказ от исследований для выявления моноклональной секреции.

Другой широко известный симптом парапротеинемии — повышение уровня общего белка сыворотки крови за счет фракции глобулинов. Необходимо помнить, что это не абсолютный признак и связан он с далеко зашедшим заболеванием, когда масса опухоли значительна. Выраженные поликлональные гипергаммаглобулинемии характеризуются такой же биохимической картиной.

Еще одно проявление парапротеинемии — синдром гипервязкости. Его развитие обусловлено не только общим содержанием М-компонента, но и качеством моноклонального иммуноглобулина: высокомолекулярные парапротеины (IgM, полимерный IgA), а также белки, склонные к образованию крупных циркулирующих агрегатов (например, моноклональный IgG3), наиболее часто приводят к появлению гипервязкости. Описаны единичные случаи развития синдрома гипервязкости при миеломе Бенс-Джонса к-типа. В этих случаях моноклональные L-цепи проявляли необычную способность к агрегации, образуя комплексы с молекулярной массой до нескольких миллионов дальтон.

Такие состояния, как упорная протеинурия, особенно в отсутствие клеточного осадка, острая или хроническая почечная недостаточность, могут быть первыми симптомами секреции белка Бенс-Джонса. При этом отсутствуют такие привычные признаки миеломной болезни, как повышение СОЭ и гиперпротеинемия, а протеинурия может быть минимальной и ошибочно оценивается как проявление пиелонефрита. В таких случаях диагностика очень сложна, тем более что пациенты этой группы, как правило, попадают под наблюдение гематолога поздно, а в основном находятся на лечении в нефрологических отделениях.

При клинических проявлениях холодовой гемагглютинации пациент должен быть обследован на наличие моноклонального макроглобулина, практически всегда к-типа, проявляющего антительную активность по отношению к I-антигену мембраны эритроцитов. Оптимум активности этих антител приходится на температуру ниже температуры тела, чем и объясняются особенности клинической картины этого заболевания. Синтез моноклональных Холодовых агглютининов может быть связан с лимфопролиферативным процессом. В таких случаях секреция, как правило, очень незначительна и при рутинном исследовании в биохимической лаборатории обычно не выявляется.

Наличие клинических и лабораторных признаков криоглобулинемии должно насторожить в отношении моноклональной секреции, поскольку почти в половине случаев криоглобулинемия зависит от присутствия парапротеина в сыворотке крови. Тяжесть клинической симптоматики обусловливается не столько концентрацией криоглобулина, сколько температурой осаждения. В то же время установлено, что при повышении концентрации криоглобулинов температура криопреципитации может повышаться, приближаясь к температуре тела.

Криоглобулинемия I типа выявляется главным образом при миеломной болезни или макроглобулинемии Вальденстрема. Симптоматика связана с отложением криопреципитата в основном в сосудах кожи, что приводит к развитию геморрагического или язвенно-геморрагического васкулита, синдрома Рейно. Криоглобулинемия II типа, при которой парапротеин обладает активностью ревматоидного фактора, ассоциируется с лимфомами, хроническим лимфолейкозом, макроглобулинемией Вальденстрема, миеломной болезнью. Кроме того, она может быть связана с инфицированием вирусом гепатита С или В. Среди клинических проявлений отмечаются характерные признаки иммунокомплексной патологии: васкулит, артрит, гломерулонефрит.

В ряде случаев первым и некоторое время единственным проявлением заболевания, сопровождающегося моноклональной секрецией, может быть развитие AL-амилоидоза с характерной для него клинической картиной. В состав амилоида данного вида входят моноклональные L-цепи или их вариабельные районы (VL), причем преобладают Х-цепи, которые встречаются приблизительно в 2 раза чаще, чем к-цепи. Именно в составе амилоида была идентифицирована новая подгруппа Х-цепей (XVI), которая особенно часто является причиной развития AL-амилоидоза.

При исследовании аминокислотного состава амилоида и белков-предшественников обнаружено замещение части гидрофильных аминокислотных остатков в консервативной области вариабельных доменов на гидрофобные, что сказывается на ухудшении растворимости белка и склонности к образованию агрегатов. Присущая таким белкам «амилоидогенность» была продемонстрирована в опытах in vivo: при введении мышам очищенных белков Бенс-Джонса, полученных от больных с амилоидозом, развивался типичный амилоидоз, причем в состав амилоида входили введенные моноклональные L-цепи.

Типичным показанием к проведению иммунохимического исследования являются остеодеструкции плоских костей, особенно единичные и труднодоступные для биопсии.

Неясные по происхождению плазмоцитозы костного мозга, особенно при умеренном повышении содержания плазматических клеток, также нуждаются в иммунохимической характеристике при проведении дифференциальной диагностики.

Подозрение на наличие М-градиента при рутинном лабораторном исследовании (ЭФ в биохимической лаборатории) должно служить поводом для развернутого иммунохимического исследования, учитывая рассмотренные ранее случаи возникновения ложных М-градиентов.

Частые инфекции легких, верхних дыхательных путей, мочеполовой системы (иногда в дебюте заболеваний, связанных с В-клеточной пролиферацией) следует расценивать как проявление вторичной гипогаммаглобулинемии. Ее генез сложен и связан как со снижением количества нормальных В-клеток, так и с нарушением межклеточных взаимодействий, регулирующих синтез иммуноглобулинов. При рецидивирующих, плохо поддающихся лечению инфекционных осложнениях пациент нуждается как минимум в оценке уровня сывороточных иммуноглобулинов.

Кроме того, перед назначением заместительной терапии препаратами у-глобулинов, особенно вводимыми внутривенно, при любых заболеваниях необходимо исследование сывороточных иммуноглобулинов для исключения первичного селективного IgA-дефицита. Этот самый распространенный из первичных гуморальных иммунодефицитов (частота в популяции достигает 1:700) в ряде случаев протекает бессимптомно. Повторное введение таким больным препарата у-глобулина, содержащего чужеродный для них белок IgA, приводит к развитию выраженных реакций.

Иммунохимические исследования периодически проводят в ходе лечения больных парапротеинемическими гемобластозами и с другими секретирующими В-клеточными опухолями для оценки эффективности лечения, а также пациентам с моноклональными гаммапатиями неясного генеза (МГНЗ).

  • Общий анализ крови: определение эритроцитов и субпопуляций эритроцитов, эритроцитарных индексов, лейкоцитов и полной лейкоцитной формулы, тромбоцитов, тромбоцитарных индексов, гемоглобина, гематокрита, классов патологических клеток, уровня ретикулоцитов и ретикулоцитарной формулы.
  • Общий анализ мочи : глюкоза, билирубин, кетоновые тела, белок, уробилиноген, нитриты, удельный вес мочи и ее реакция (pH), а также автоматический анализ клеточного состава мочи (эритроциты, лейкоциты, бактерии, эпителиальные клетки, цилиндры, кристаллы, дрожжевые грибки и сперматозоиды, проводимость мочи).
  • Анализ мочи по Зимницкому.
  • Анализ мочи по Аддису.
  • Анализ мочи по Нечипопренко.
  • Определение морфологии эритроцитов в моче (дисморфные эритроциты).
  • Уроцитограмма.
  • Определение альбумина в моче.
  • Биохимический анализ крови: альбумин, общий белок, креатинин, мочевина, триглицериды, холестерин, ЛПНП-холестерин, ЛПВП-холестерин, глюкоза, антистрептолизин-О (АСЛО), ревматоидный фактор (РФ), С-реактивный белок (СРБ), α-амилаза, панкреатическая амилаза, аланинаминотрансфераза (АЛТ), аспартатаминотрансфераза (АСТ), гамма-глутамилтранспептидаза, креатинкиназа (КК), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), щелочная фосфатаза (ЩФ),компоненты комплемента (С3 и С4), билирубин (общий билирубин, прямой билирубин), мочевая кислота, калий, натрий, хлор, кальций общий, магний, фосфор неорганический, железо.
  • Определение гликированного гемоглобина (в капиллярной и венозной крови).
  • Иммунохимический анализ: тиреотропный гормон, свободный трийодтиронин (Т3), свободный тироксин, антитела к тиреопероксидазе, антитела к тиреоглобулину, фолликулостимулирующий гормон, лютеинезирующий гормон, эстрадиол, глобулин связывающий половые гормоны , прогестерон, пролактин, витамин D, витамин B12, фолиевая кислота, С-пептид, инсулин, кортизол, ферритин, адренокортикотропный гормон, паратгормон, дегидроэпиандростерон сульфат (ДГЭА-сульфат), натрийуретического гормона (В-типа) N-концевой пропептид (NT-proBNP), маркер резорбции костной ткани β-CrossLaps, маркер формирования костного матрикса P1NP, остеокальцин.
  • Иммунохемилюминесцентный анализ для диагностики аллергических, аутоиммунных и воспалительных заболеваний: скрининг на ингаляционные аллергены, смеси пищевых аллергенов, смеси домашней пыли, смеси грибковых аллергенов, смеси эпителиальных аллергенов, смеси пыльцы сорных трав, злаковых трав, смеси пыльцы деревьев, индивидуальные пищевые аллергены (более 20 позиций), комплекс антиядерных антител (Elia CTD Screen), антитела к двуцепочечной ДНК, антитела к Sm, Ro, La, RNP70, Scl 70, U1RNP-белкам, антитела к циклическому цитрулиновому пептиду, антитела к базальной мембране клубочков почек, антитела к протеиназе-3, антитела к миелопероксидазе, IgG, IgM антитела к β2-гликопротеину I, IgG, IgM антитела к кардиолипину.
  • Коагулогические исследования: протромбиновое время, протромбиновое время по Квику, МНО, активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), тромбиновое время, фибриноген, D-димер, С1-ингибитор эстеразы.
  • Система постоянного измерения уровня глюкозы крови в амбулаторных условиях.
  • Оральный глюкозотолерантный тест.
  • Микроскопическая диагностика мазка отделяемого мочеполовых органов (с описанием флоры и клеточного состава).

В настоящее клинико-лабораторная диагностика оснащена самыми современными анализаторами крови и мочи, позволяющими интенсифицировать работу и повысить качество исследований. Проводится иммунологический анализ у детей с аллергией и аутоиммунными заболеваниями на приборе ImmunoCap, который является «золотым стандартом» в обследовании этих детей. Применяются методики для ранней диагностики нарушения углеводного обмена (определение гликированного гемоглобина, микроальбуминурии), трехсуточное мониторирование уровня глюкозы в интерстициальной жидкости (Guardian), что позволяет правильно диагностировать, проводить коррекцию питания и лечения у этой группы детей. Применяется коагулометрия.

Перспективы развития – совершенствование диагностики патологии органов и систем у детей в амбулаторной практике, дальнейшее развитие изучения патологии сна, расширение возможностей лабораторных исследований, подготовка специалистов.

  • Автоматические гематологические анализаторы крови Sysmex XN-1000 , Advia 2120
  • Высокопроизводительный анализатор мочи Cobas u 411
  • Автоматический анализатор клеточного состава мочи Sysmex UF-1000i
  • Автоматический биохимический анализатор крови Cobas c311
  • Иммунохимический автоматический анализатор крови Cobas e411
  • Автоматический иммунохемилюминесцентный анализатор Immunocap Phadia 250 для in vitro диагностики аллергических, аутоиммунных и воспалительных заболеваний
  • Анализатор для исследования системы гемостаза – автоматический коагулометр Sysmex CS-2000i
  • Система постоянного измерения уровня глюкозы крови Guardian Real-time Medtronic MiniMed
  • Анализатор DCA Vantage Siemens

Иммунохимический анализ крови основан на выявлении в крови антител к определённому антигену и определении их концентрации. Это могут быть антигены бактерий, вирусов, паразитов или собственные (изменённые или неизменённые) антигены организма. Поскольку иммуноглобулины всегда специфичны по отношению к антигену, то выявление их в крови однозначно указывает на присутствие конкретного антигена.

Принцип анализа очень прост и точен – если есть антитело, значит, есть и искомый антиген. Но на какие именно антитела проводится анализ? Вот классы антител, которые может выявить анализ:

1. Иммуноглобулин А (секреторный). Этот тип иммуноглобулинов присутствует в основном на слизистых оболочках. В крови его содержится около 15% от общего количества иммуноглобулинов. Его количество повышается при аутоиммунных заболеваниях и снижается при иммунодефицитных состояниях.

2. Иммуноглобулин Е (противопаразитарный, аллергический). В норме это антитела к паразитарным антигенам. Патологическая их выработка возникает при аллергических реакциях.

3. Иммуноглобулин G. Это белок стойкого иммунитета против бактериальных и вирусных инфекций. В норме присутствуют в постоянной концентрации IgG к антигенам возбудителей перенесённых заболеваний или к тем, от которых были сделаны прививки. Повышение их количества говорит о хроническом воспалительном или аутоиммунном процессе. Снижение – об иммунодефиците.

4. Иммуноглобулин М. Обладает способностью связывать сразу несколько однотипных антигенов. Выделяется при первичном контакте иммунной системы с неизвестным антигеном, в острой фазе воспалительных заболеваний, в первые дни после прививок. К этой же группе относятся антигены групп крови, резус-фактора и ревматоидный фактор. Снижение их содержания говорит об иммунодефиците различного происхождения (иммуносупрессивная терапия, лучевой иммунодефицит, удаление селезёнки).

Иммуноглобулины всех перечисленных классов являются специфичными, они выделяются только при наличии конкретного, «своего» иммуноглобулина, и их концентрация повышается только при наличии этого антигена. Такая избирательность делает иммунологический анализ очень точным методом диагностики.

Показаний для назначения такого анализа много, он позволяет подтвердить или исключить многие заболевания, такие как:

  • бактериальные и вирусные инфекции, паразитарные инвазии (повышение антител к соответствующим антигенам),
  • аллергические реакции (выявление специфических IgE),
  • аутоиммунные заболевания (появление патологических иммуноглобулинов к собственным тканям),
  • опухолевые процессы (наличие специфических антител к некоторым видам злокачественных опухолей),
  • иммунодефицитные состояния (снижение количества антител) – врождённые и приобретённые иммунодефициты, лейкозы и лейкемии, лучевая болезнь.

Также анализ крови на иммунологию назначают для оценки эффективности лечения аутоиммунных, иммунодефицитных и аллергических состояний, для определения групп крови, наличия антиспермальных антител как причины бесплодия, при подготовке к сложным оперативным вмешательствам и при пересадке органов для подбора донора и своевременного выявления реакции отторжения трансплантата.

Как и у любого метода исследования, у иммунологического анализа есть противопоказания. Его нельзя проводить в течение двух недель после поставленных прививок – в этом случае очень вероятен ложноположительный результат. Также не следует проводить анализ во время острых воспалительных заболеваний или при обострении хронических – в это время количество лейкоцитов повышено и результат будет неточным. У женщин есть ещё одно противопоказание – результаты во время менструации будут неточными.

Во всех этих случаях анализ стоит отложить. Следует отметить, что все противопоказания к этому анализу связаны только с возможным искажением его результатов, но не с отрицательными последствиями для организма. В остальном его можно проводить даже у новорожденных детей и беременных женщин. Анализ не требует специальной подготовки.

Это особая группа антител класса М, которые определяют групповую принадлежность крови. При групповой несовместимости эти антитела вызывают агглютинацию (склеивание) эритроцитов и их последующий распад. Такое состояние встречается после переливания крови при групповой несовместимости. Этот же механизм лежит в основе резус-конфликта при беременности (отрицательный резус-фактор у матери и положительный – у плода) и реакции отторжения трансплантата при пересадке органов.

Кроме общеизвестных систем АВ0 и резус-фактора существует ещё несколько других антигенных систем, которые определяют группы крови. Они учитываются при пересадке органов (главный комплекс гистосовместимости) в некоторых случаях – при переливании крови, если возникла агглютинация при переливании одногруппной крови.

Определение групп крови проводится с использованием трёх сывороток, с известными антигенами – агглютининами А, В и АВ и специального планшета с четырьмя лунками – тремя опытными и одной контрольной. Кровь пациента вносят во все четыре лунки, в каждую из трёх опытных добавляют свою сыворотку с антигеном. По наличию или отсутствию агглютинации в каждой из них определяют группу крови. В контрольную лунку сыворотки не добавляют.

Резус-фактор определяется с помощью антител к нему методом ИФА. Метод основан на том, что антитела к Rh-фактору вступят с ним в реакцию, которая вызовет агглютинацию эритроцитов. Если же резус-фактор отсутствует в крови пациента, то реакции не будет.

Определение главного комплекса гистосовместимости проводится методом ПЦР. При этом последовательно выявляется каждый антиген из всего комплекса. Метод точен, но очень трудоёмок, поэтому не может являться рутинным исследованием.

Помимо иммунологического анализа крови существует ряд других важных анализов, выявляющих различные заболевания. Например, серологический анализ крови, о котором можно прочитать в этой статье, или биохимический анализ крови, подробности которого изложены здесь.

источник

Иммунохимический анализ — это диагностическое исследование комплексного направления, необходимое для определения популяции клеток, белков сыворотки А, 6, М, циркулирующих иммунных комплексов, количества лейкоцитов, которые участвуют в фагоцитозе.

Проводится иммунохимический анализ для решения следующих вопросов:

  1. Определение соотношения между течением заболевания и иммунными нарушениями.
  2. При отклонении показателей от нормы.
  3. Чтобы собрать данные на начальном этапе болезни.
  4. Получить сведения о терапии и количестве принимаемых препаратов.

Показаниями для проведения данного вида диагностики могут стать такие нарушения:

  1. Частые инфекции.
  2. Инфекционные заболевания, протекающие в тяжелой форме.
  3. Врожденный или приобретенный иммунодефицит.
  4. Если у человека имеется аутоиммунная патология.
  5. Присутствие аллергии.
  6. Необходимость хирургического вмешательства.
  7. Осложнения после операции.
  8. Анорексия.
  9. Различные интоксикации.
  10. Наличие опухолей.
  11. Сахарный диабет.
  12. Развитие побочных реакций на медикаменты.

Справка! Во время приема иммуномодуляторов в динамике проводится контроль в виде иммунохимического анализа.

Полученную иммунограмму расшифровывает лечащий врач.

Что из себя представляет иммунохроматография рассказывается на видео:

Забор крови на анализ проводится по стандартной схеме. Для анализа понадобится венозная кровь, которая в дальнейшем отправляется в лабораторию и исследуется при помощи анализатора.

Важно! Благодаря новейшей медицинской технике результаты можно узнать через считанные минуты. Но многие лаборатории имеют возможность выдавать данные только через 1-2 дня.

Стандартизованная операционная процедура (СОП) определяет порядок выполнения иммунохимического анализа крови.

Особой подготовки к проведению процедуры не нужно, но имеется ряд правил, благодаря которым можно получить наиболее достоверный результат:

  1. Сдавать кровь нужно утром натощак.
  2. Допустимо выпить стакан негазированной воды, но есть запрещено.
  3. Крайний прием пищи осуществляется вечером, до 21 часа.
  4. За двое суток до обследования стоит ограничить себя в употреблении жирной и белковой пищи. Эти вещества (жир и белок) увеличивают свертываемость крови, и она становится мутной. А это обстоятельство искажает правильность результатов обследования.
  5. За 2-3 дня до сдачи анализа также запрещено употреблять алкогольные напитки, они влияют на большинство показателей исследования, в том числе на гормоны.
  6. За день до иммунохимического анализа нельзя курить. Если человеку трудно это сделать заранее, то нужно отказаться от сигарет хотя бы за два часа до похода в лабораторию.
  7. Женщинам стоит знать, что уровень половых гормонов в различные фазы цикла меняется, поэтому обязательно следует сообщить врачу о том, когда в последний раз была менструация. При беременности учитывается срок и триместр.
  8. Врачи рекомендуют временно приостановить прием лекарственных средств. Обычно это делается за неделю-полторы до сдачи анализа. Если такой возможности нет, то при расшифровке анализа стоит учитывать наличие в крови какого-либо лекарства.
  9. Кровь нельзя сдавать сразу после физической активности или психологического напряжения. Уже с вечера до анализа следует воздержаться от физического и эмоционального напряжения. Перед прохождением исследования стоит успокоиться, привести себя в норму, обычно на это уходит 20-25 минут, и только потом можно отправляться в кабинет врача.

В некоторых случаях назначается иммунохимический анализ кала на скрытую кровь.

Она выделяется при некоторых патологиях, например, при диагностике рака прямой кишки, полипов или эрозии в слизистой кишечника. Подготовка в этом случае будет стандартная, как и при обычном анализе кала.

Если берется кровь на прогестерон, то ее сдают на 22-й или 23-й день после начала менструации.

При этом накануне анализа исключаются:

  1. Стрессовые состояния.
  2. Спиртные напитки.
  3. Курение.
  4. Жирные блюда.

Внимание! Также в некоторых лабораториях принимают мочу на анализ иммунитета. Он может выявить наличие паразитарной инфекции, наличие большого количества гормонов при беременности и т.д.

Перед тем как направлять пациента на комплексный иммунохимический анализ, врач должен собрать некоторые сведения о пациенте, чтобы после исследования можно было провести соотношение его результатов и истории болезни человека.

К дополнительным сведениям можно отнести:

  1. Определение связи между клинической картиной болезни и сдвигами в иммунной системе.
  2. Определение отличия показателей в анализе от нормы.
  3. Собирание данных о начале болезни.
  4. Сведения о том, чем лечился больной и о количестве принимаемых препаратов.

Справка! Расшифровкой анализа занимается врач, стоит отметить, что это дело не простое и требует особых знаний.

Ниже представлены данные, разработанные учеными, в которых отражены данные значений основных показателей ИХА, которые могут быть допустимыми, и предполагаемые причины отклонений от нормы:

  1. Иммуноглобулин А – норма составляет 17% от общего числа иммуноглобулина. Если норма превышена, то это может указывать на красную волчанку, печеночные и почечные патологии. Сниженные показатели бывают при циррозе и отравлении.
  2. Иммуноглобулин Е – норма 0,2% от общего количества кровяного иммуноглобулина. Когда уровень его повышается, то это может говорить о заражении гельминтами. Проявляться они могут аллергическими реакциями: экземой, зудом, отечностью и т.д.
  3. Иммуноглобулин М – показатель нормы – 5-5,2 процента от общего количества вещества. При повышении показателя диагностируются печеночные патологии, кандидозы, волчанка, инфекции в острой стадии.
  4. Пролактин – у мужчин 103–535 мМЕ/л, у женщин 59–699 мМе/л. Повышенные показатели этого вещества могут говорить о наличии туберкулеза, либо новообразования в гипофизе, также повышается пролактин после приема некоторых медикаментов.
  5. Лютеотропин – у мужчин – 1,15-8,9 мЕд/л., у женщин норма зависит от менструального цикла. У мужчин вызывает секрецию тестостерона, у женщин контролирует менструальный цикл. Снижение может быть при опухолях в гипофизе, ожирении или аменорее, повышение при проблемах в работе почек, поликистозе яичников, эндометриозе или голодании.

На видео доктор рассказывает о современных лабораторных методах исследования:

Иммунохимические анализы крови могут делиться на различные категории, а значит и ценовой диапазон будет разным:

  1. Стандартное взятие венозной крови на иммунохимическое исследование обойдется человеку в пределах 170-200 рублей.
  2. Если проводить посев мочи на чувствительность микроорганизмов к антибиотикам, то стоимость анализа будет дороже, примерно 900 рублей.

Важно! В некоторых лечебных центрах взятие биоматериала оплачивается отдельно от самого анализа.

Иммунная реакция организма и состояние гормонального фона крайне важны. В случае каких-либо нарушений в этой области показан иммунохимический анализ крови.

Это наиболее точный метод выявления многих нарушений, таких как наследственные проблемы с иммунитетом, наличие или предрасположенность к опухолям, аутоиммунные нарушения, проблемы с зачатием.

источник

Иммунохимическое исследование крови является совокупным обследовательским мероприятием. Этот способ диагностики поможет узнать то, насколько защищен человеческий организм от разных инфекций и отрицательных факторов внешнего воздействия. Если сбои в иммунной системе будут до того, как человек родился, значит дефицит иммунитета будет врожденного характера, а если после, тогда такое состояние будет приобретенным.

Для оценки иммунного статуса человека выполняют это исследование. Оно необходимо для того, чтобы установить:

  • клеточные популяции;
  • число иммуноглобулиновых компонентов сыворотки крови;
  • циркулирующие комплексы антиген-антитело;
  • значения лейкоцитарных клеток (фагоцитов), принимающих участие в поглощении крупных макромолекулярных комплексов или корпускул, бактериальных микроорганизмов.

Для того, чтобы провести иммунохимический анализ крови, надо чтобы были собраны следующие данные:

  • пропорция между клиникой и изменением иммунного статуса;
  • разница существующих параметров от нормальных;
  • информация о начальных проявлениях патологического процесса;
  • данные о лечебных мерах и объеме применяемых лекарственных средств.

При выполнении иммунохимического исследования крови главное значение принадлежит циркулирующим иммунным комплексам (антиген воздействует на антитело). Исследования применяются для того, чтобы установить:

  • первопричину инфекционного процесса паразитарного генеза;
  • количественный показатель гормональных соединений в то время, когда женщина беременна;
  • наличие маркеров;
  • группу крови.

Иммунохимия позволяет выявить разведение сыворотки, где обнаруживаются антитела (титр антител) к патогенным микроорганизмам, изучить особенности иммунитета человека. Антигенные соединения обнаруживают благодаря сывороткам крови, в которых содержатся белковые соединения плазмы крови, препятствующие размножению возбудителей и подавляющие выделяемые ими токсические соединения (антитела). Иммунологические исследования помогут выявить антитела к предварительно определяемому антигену.

Для анализа берется кровяной биоматериал у пациента на протяжении первых суток патологического процесса. Постановка диагноза осуществляется после проведенного второго исследования спустя две недели.

Иммунохимическое исследование часто показано при состояниях, если:

  • Подозреваются дефекты иммунной системы, вызванные отягощенной наследственностью.
  • Подозревается онкологическая патология.
  • Женщина не может долго зачать ребенка.
  • Существуют аутоиммунные патологические процессы.

Так как иммунохимическое исследование является совокупностью тестовых анализов, перечень составляющих его параметров разнообразен. Часто выполняют иммуноферментное и гормональное исследования, поэтому параметрами считаются половые гормональные соединения и разные иммуноглобулиновые классы. Исследуются иммуноглобулины (Ig):

  • А — ответственен за свойства защиты слизистых легочной, бронхиальных, почечных, мочеточниковых, мочепузырных тканей, включая слизистые тканевые структуры пищеварительного тракта. В остро протекающей фазе этот иммуноглобулин не выявляется. Он проявляется с начала второй недели инфекционного процесса. В позднем временном промежутке он укажет на хронизацию патологического процесса.
  • Е — определяет то, как реагирует организм на аллергены и инфекционные процессы, причиной которых являются паразиты. Но при определенных инфекционных процессах и типах аллергических реакций показатель данного иммуноглобулина остается неизменным. Для этого необходимы дополнительные исследования.
  • М — иммуноглобулиновый элемент остро протекающего срока патологического процесса. Этот иммуноглобулин возникает в кровяной среде первым на пятые сутки после внедрения инфекционного агента в человеческий организм. Находится в крови примерно 1,5 месяца, потом пропадает.
  • G — остаточный иммуноглобулин, показывает присутствие резистентности к какому-либо патологическому процессу. В кровяной среде проявляется где-то через 30 суток после того, как начался патологический процесс. Остается в крови долгие годы или на всю оставшуюся жизнь, но об присутствии патологического процесса не сообщает.
  • D — в минимальном объеме имеется у каждого человека. Способен показать, как дефицитное состояние иммунитета, так и нормальное состояние организма.

Также исследуются гормоны:

  • Лютеинизирующее гипофизарное гормональное соединение. Ответственно за функцию половой системы. От его синтеза существует зависимость концентрации иных половых гормональных соединений (прогестеронового, эстрогенного, тестостеронового). У женского пола данный гормон отвечает за месячный цикл.
  • Пролактиновое гормональное соединение. Отвечает за процесс, при котором происходит секреция молока у родившей женщины. В огромных объемах вызывает торможение синтеза половых гормонов.
  • Эстрадиоловое гормональное соединение. Существует у женщин, ответственно за то, как созревают яйцеклетки, выражаются вторично проявленные половые признаки, происходит месячный цикл.

Забирают кровяной биоматериал на иммунохимию стандартно. У больного берут кровь из венозного сосуда. Она исследуется особым анализаторным устройством. Поэтому данные анализа будут готовы спустя 12-22 минуты.

Многие лаборатории дают такую информацию в срок от 1 до 2 суток после того, как больной сдал кровь. Для достоверности результатов требуется соблюдение некоторых условий.

Кровяной биоматериал надо сдавать в утреннее время натощак.

Утром допустимо утолить жажду простой водой, но не следует принимать пищу. Последняя трапеза должна быть не позднее 10 часов в вечернее время перед исследованием. Также рекомендовано воздержание от продуктов, обильно богатых жирами и белками.

Эти соединения увеличивают кровяную сворачиваемость, сыворотка становится помутненной, а это помешает исследованию биоматериала. Перед данным исследованием за 2-3 суток не следует пить алкоголь, иначе исследование будет недостоверным. Также противопоказано курение хотя бы за 2-3 часа до исследования.

Женщина обязана уведомить доктора о периоде месячного цикла. От этого периода зависит концентрация половых гормональных соединений, которые изменяются согласно времени цикла. Если женщина беременна, то учитывают срок и триместровый период.

Перед тем, как выполнять исследование, отменяют лекарства. Если доктором отмена не рекомендована, то проведенная расшифровка должна учитывать тип и дозу лекарственного средства и то, как оно влияет на разные параметры. Не сдают анализ после того, как человек физически трудился, испытал стрессовые ситуации.

Перед исследованием надо присесть минут на 7-11, быть в спокойном состоянии и только потом сдавать кровь.

Данные иммунологического исследования расшифровывает лечащий доктор. Само исследование нельзя назвать простым, оно содержит разные особенности. Самостоятельная расшифровка исследования не рекомендована.

Важно знать, что для того, чтобы установить диагноз, учитывают данные выполненного исследования, анамнез больного, а также другие обстоятельства.

Расшифровываются данные следующим образом:

  • Имуноглобулиновый компонент А. Нормальный параметр его состоит в пределах 15% от общего числа антител (иммуноглобулинов) в крови. Если параметр высокий, то у больного красная волчанка, печеночная, почечная, соединительнотканная патологии. Низкий уровень наблюдается при циррозных процессах и интоксикациях.
  • Иммуноглобулиновый компонент Е. Высокая концентрация данного иммуноглобулина говорит о паразитарной инвазии или атопических реакциях при аллергии (отечные явления, насморк, высыпания, кожный зуд).
  • Иммуноглобулиновый компонент М. Его показатель содержит не более 5% всего объема антител. Концентрация повышена при инфекционных процессах разных причин в остро протекающей фазе, молочнице, тяжелых повреждениях печени, системной красной волчанке.
  • Пролактиновый гормон. У мужского пола нормальный показатель более четкий, чем у женского, поскольку у женщины норма связана с месячным циклом. У мужчины норма от 105-110 до 530-540 мМЕ/л. У женщины от 65-70 до 720-725 мМЕ/л. При нормальных условиях у женщины концентрация увеличивается во время лактации. Еще на пролактиновую концентрацию оказывают влияние некоторые лекарства и патологические процессы (туберкулез, поликистозные изменения яичников, гипофизарные злокачественные новообразования).
  • Лютеинизирующий гормон. Его концентрация изменяется согласно месячного цикла у женщины, а у мужчины составляет 1,14-9 мЕд/л. Низкая концентрация бывает при онкологии гипофиза, избыточной массе тела, отсутствии менструации. Высокая — при поликистозных изменениях яичников, недостаточности почек, разрастании эндометрия, а также при состоянии, если человек долго голодает.

При расшифровывании данных большую важность представляет отягощенная наследственность, состояние больного (месячный цикл, беременность, хронические патологические процессы), а также вероятные погрешности и случаи, при которых больной неправильно подготовился.

Данное исследование представляет огромную важность для диагностики тяжело протекающих инфекционных процессов, аутоиммунной патологии, интоксикационных состояний, разных видов аллергий, проблем с репродукцией. Поэтому больной обязан соблюдать все рекомендации доктора при проведении данного анализа, что позволит точно определить патологический процесс и эффективно с ним бороться.

источник

Иммунохимический анализ — это комплексное обследование, предназначенное для установления популяции клеток, количества сывороточного иммуноглобулина А, 6, М, перемещающихся иммунных комплексов, параметров лейкоцитов, участвующих в фагоцитозе.

Для проведения анализа необходимо собрать материал по таким вопросам, как:

  • соотношение между клинической картиной и иммунными сдвигами;
  • отличие показателей от нормы;
  • данные о начале заболевания;
  • сведения о лечении и количестве препаратов.

В основе проведения исследования находится специфическое воздействие антигена на антитело.

Анализы применяют для установления причины появления паразитарной инфекции, количества гормонов во время беременности, присутствия маркеров, определения группы крови.

В процессе работы находят основные титры антител к возбудителям болезни, изучают иммунную систему и ее устойчивость к инфекционному агенту.

Антиген находят с помощью сывороток крови, в состав которых входят антитела. Иммунологический анализ позволяет определить антитела по заранее известному антигену.

Для исследования берут кровь у больного в первые сутки заболевания. Диагноз ставят после проведения второго анализа через 14 дней.

Для реакции характерны 2 периода:

  • фаза, состоящая из связывания антигена и антитела;
  • результаты взаимодействия, проявляющиеся образованием иммунных комплексов.

Учитывают свойства антигена, влияющие на внешние признаки реакции, а также состав среды, концентрацию соли, температуру.

Иммунохимические методы тестирования сывороточных белков крови при заболеваниях и в норме предоставляют материал, необходимый для установления оптимальных методов изучения. Исследуют в процессе работы динамику белка сыворотки крови, проводят анализ для определения качества плазмы при терапии заболеваний.

Минимальное количество IgM наблюдается при рождении ребенка, и нормальные показатели составляют 0,5-3,0г/л. Сывороточный IgEу новорожденных составляет 0,26±0,02 кЕ/л. Высокие уровни белка Х-СЛЦ наблюдают при злокачественных опухолях. У больных с хронической почечной недостаточностью и сахарным диабетом наибольшее значение сывороточного белка 32,5 мг/л, наименьшее -12 мг/л.

Для клинической оценки черепно-мозговой травмы иммунохимические показатели необходимы для выявления спектра белков в сыворотке крови и степени тяжести состояния больного.

Изучают свойства АФП, сывороточного альбумина СА. Определенная взаимосвязь существует между тяжестью травмы, воспалением и гипоксией, и белками крови.

У больных с травмами методом анализа определена связь между токсикозом и количеством альбумина ТСА.

Анализ крови, выполненный на современном оборудовании, позволяет быстро поставить диагноз. Приборы для проведения иммунохимического исследования эффективно управляют коечным фондом больницы за счет ускорения получения результатов.

Экономия средств полностью покрывает затраты по аналогичному исследованию в больнице скорой помощи. Иммунохимический анализ имеет высокую специфичность, достигающую 98%, дифференцирует состав веществ с одинаковым строением. Чувствительность анализа высокая.

В схему иммунохимического анализа входит тест-система, в составе которой находится определенное антитело.

Используют для исследования моноклональные и поликлональные антитела, полученные из одной или нескольких линий клеток организма пациента. Различие антител заключается в степени их связывающей способности. Результат анализа измеряют с помощью V прямой детекции, состоящей из таких параметров, как:

Еще один вид измерения результата — V непрямая детекция, применяемая при невидимых результатах реакции. Мелкоточечное исследование позволяет выполнить анализ многих веществ по нескольким параметрам в объеме пробы 0,1-1,0 мл.

Оценка результата исследования позволяет врачу установить причину появившейся проблемы и принять меры по ее устранению. Для установления причины бесплодия врач расшифровывает уровень гормонов.

Лютеотропин помогает нормальному функционированию половых желез. Его повышенный уровень свидетельствует о появлении нарушений в их работе. В процессе обследования устанавливают свободный F3 и общий F2 эстриол.

Резкое уменьшение его количества при беременности указывает на патологию в формировании и развитии плода.

При расшифровке используют значения уровня В-ХГЧ и АФП (альфа-фетопротин). Кровь на уровень прогестерона сдают в одно и то же время суток. Исключаются накануне исследования:

  • стрессовые ситуации;
  • прием алкоголя;
  • курение;
  • питание жирными продуктами.

Анализ на скрытую кровь необходим для установления заболевания раком прямой кишки, эрозивных повреждениях кишечника.

Врач устанавливает такие недуги, как рак и полипы, протекающие без видимых симптомов, за исключением скрытого кровотечения. Анализ помогает больным пройти полное обследование толстого и тонкого кишечника.

Исследование устанавливает количество гемоглобина в каловых массах и не требует проведения специальных подготовительных мероприятий.

Пробирки для взятия образцов фекалий имеют стандартный размер 13х10 мм и используются для работы на любом биохимическом анализаторе. Периодичность сдачи анализа для групп населения от 40 до 75 лет составляет 1 раз в 2 года.

Экспресс-тест для установления скрытого гемоглобина в кале проводят с использованием набора агентов, в состав которого входят:

  • индикаторный планшет;
  • аппликатор;
  • реагент;
  • инструктивное письмо.

Анализ основан на реакции взаимодействия гемоглобина и специфических антител с образованием комплекса антиген-антитело. По линиям розового, фиолетового цвета в тестовой зоне, определяют величину гемоглобина, превышающую нормальный показатель.

Исследование крови позволяет подтвердить наличие или отсутствие возбудителя в организме больного, обладает высокой специфичностью, указывает на время заражения и вероятные осложнения для пациента. Для анализа подбирают специфические антигены. В качестве биоматериала для изучения применяют сыворотку или плазму крови. Для постановки диагноза используют иммуноглобулины — IgM, IgA, Ig6.

Метод иммунохимического исследования позволяет выявить недуг на ранних этапах его развития и определить точный тип антител. Анализ обладает высокой точностью, и пациент перед его проведением обязан соблюдать все рекомендации специалистов.

С помощью исследования выявляют стадии инфекционного заболевания и назначают антибактериальную терапию. В первичной фазе развития недуга диапазон титра Ig6 составляет более 100, но менее 6400. В процессе развития болезни от хронического течения до восстановительного периода титры растут от >100-1600 до

Иммунохимический анализ — это комплексное обследование, предназначенное для установления популяции клеток, количества иммуноглобулина А, 6, Г, которые направляются иммунных комплексов, параметров лейкоцитов, участвующих в фагоцитозе.

Для проведения анализа необходимо собрать материал по таким вопросам, как:

  • соотношение между клинической картиной и иммунными сдвигами;
  • отличие показателей от нормы;
  • данные о начале заболевания;
  • сведения о лечения и количества препаратов.

Основные методы иммунохимического анализа крови

В основе проведения исследования находится специфическое влияние антигена на антитело.

Анализы применяют для установления причины появления паразитарной инфекции, количества гормонов во время беременности, присутствия маркеров, определение группы крови.

В процессе работы находят основные титры антител к возбудителям болезни, изучающие иммунную систему и ее устойчивость к инфекционному агенту.

Антиген находят с помощью сывороток крови, в состав которых входят антитела. Иммунологический анализ позволяет определить антитела по заранее известному антигену.

Для исследования берут кровь у больного в первые сутки заболевания. Диагноз ставят после проведения второго анализа через 14 дней.

Для реакции характерны 2 периода:

  • фаза, состоящая из связывания антигена и антитела;
  • результаты взаимодействия, которые проявляются образованием иммунных комплексов.

Учитывают свойства антигена, влияют на внешние признаки реакции, а также состав среды, концентрацию соли, температуру.

Иммунологический метод состоит из реакции агглютинации, взаимодействия с участием комплемента, иммунодефицитного анализа, реакции преципитации.

Вернуться к змістуЗначення исследований в клинической практике

Иммунохимические методы тестирования сывороточных белков крови при заболеваниях и в норме предоставляют материал, необходимый для установления оптимальных методов изучения. Исследуют в процессе работы динамика белка сыворотки крови, проводят анализ для определения качества плазмы при терапии заболеваний.

Минимальное количество IgM наблюдается при рождении ребенка, и нормальные показатели составляют 0,5-3,0 г / л. Сывороточный ІдЕу новорожденных составляет 0,26 ± 0,02 кЕ / л. Высокие уровни белка Х-слц наблюдают при злокачественных опухолях. У больных с хронической почечной недостаточностью и сахарным диабетом наибольшее значение сывороточного белка 32,5 мг / л, менее -12 мг / л.

Для клинической оценки черепно-мозговой травмы иммунохимические показатели необходимы для выявления спектра белков в сыворотке крови и степени тяжести состояния больного.

Изучают свойства АФП, сироватковогоальбуміну СА. Певнавзаємозв’язок существует между тяжестью травмы, воспалением и гипоксией, и белками крови.

У больных с травмами методом анализа определена связь между токсикозом и количеством альбумина ТСА.

Вернуться к змістуПереваги метода перед другими формами исследований

Анализ крови, выполненный на современном оборудовании, позволяет быстро поставить диагноз. Приборы для проведения иммунохимического исследования эффективно управляют коечным фондом больниц за счет ускорения получения результатов.

Экономия средств полностью покрывает затраты по аналогичным исследованием в больнице скорой помощи. Иммунохимический анализ имеет высокую специфичность, что достигает 98%, дифференцирует состав веществ с одинаковым строением. Чувствительность анализа высокая.

В схему иммунохимического анализа входит тест-система, в составе которой находится определенное антитело.

Используют для исследования моноклональные и поликлональные антитела, полученные из одной или нескольких линий клеток организма пациента. Разница антител заключается в степени их связывающей способности. Результат анализа измеряют с помощью V прямой детекции, состоящий из таких параметров, как:

Еще один вид измерения результата — V непрямая детекция, применяемая при невидимых результатах реакции. Мелкоточечная исследование позволяет выполнить анализ многих веществ по нескольким параметрам в объеме пробы 0,1-1,0 мл.

Вернуться к змістуРозшифровка иммунохимического анализа крови при бесплодии

Оценка результата исследования позволяет врачу установить причину появившейся проблемы и принять меры по ее устранению. Для установления причины бесплодия врач расшифровывает уровень гормонов.

Лютеотропін помогает нормальному функционированию половых желез. Его повышенный уровень свидетельствует о появлении нарушений в их работе. В процессе обследования устанавливают свободный F3 и общий F2 эстриол.

Резкое уменьшение его количества при беременности указывает на патологию в формировании и развитии плода.

При расшифровке используется значение уровня В-ХГЧ и АФП (альфа-фетопротін). Кровь на уровень прогестерона сдают в одно и то же время суток. Накануне исследования исключаются:

  • стрессовые ситуации;
  • прием алкоголя;
  • курение;
  • питание жирными продуктами.

Вернуться к змістуІмунохімічної исследование кала

Анализ на скрытую кровь необходим для установления заболевания раком прямой кишки, эрозивных повреждениях кишечника.

Врач устанавливает такие недуги, как рак и полипы, которые протекают без видимых симптомов, за исключением скрытого кровотечения. Анализ помогает больным пройти полное обследование толстого и тонкого кишечника.

Исследование устанавливает количество гемоглобина в каловых массах и не требует проведения специальных подготовительных мероприятий.

Пробирки для взятия образцов фекалий имеют стандартный размер 13х10 мм и используются для работы на любом биохимическом анализаторе. Периодичность сдачи анализа для групп населения от 40 до 75 лет составляет 1 раз в 2 года.

Экспресс-тест для установления скрытого гемоглобина в кале проводят с использованием набора агентов, в состав которого входят:

  • индикаторный планшет;
  • аппликатор;
  • реагент;
  • инструктивное письмо.

Анализ основан на реакции взаимодействия гемоглобина и специфических антител с образованием комплекса антиген-антитело. По линиям розового, фиолетового цвета на тестовом участке, определяют величину гемоглобина, что превышает нормальный показатель.

Исследование крови позволяет подтвердить наличие или отсутствие возбудителя в организме больного, имеет высокую специфичность, указывает на время заражения и возможные осложнения для пациента. Для анализа подбирают специфические антигены. Как биоматериала для изучения применяют сыворотку или плазму крови. Для постановки диагноза используют иммуноглобулины — IgM, IgA, Ig6.

Метод иммунохимического исследования позволяет выявить болезнь на ранних этапах его развития, и определить точный тип антител. Анализ имеет высокую точность, и пациент перед проведением обязан придерживаться всех рекомендаций специалистов.

С помощью исследования выявляют стадии инфекционного заболевания и назначают антибактериальную терапию. В первичной фазе развития недуга диапазон титра Ig6 составляет более 100, но менее 6400. В процессе развития болезни от хронического течения до восстановительного периода титры растут от gt; 100-1600 до lt; 100-400.

О наличии болезни судят через 2 недели после заражения. С помощью анализа определяют очень ранние стадии болезни с указанием пограничных титров в первой дозе сыворотки.

Необходимо предложить больному вторичное обследование для установления повторного инфицирования.

При отсутствии изменений титров антител врач отказывается от назначения лечения с помощью антибиотиков. У людей, переболевших хламидийной инфекцией, повышены антитела указывают на отсутствие инфекции.

Тестовые наборы — высококачественная аппаратура, которая не допускает появления ложных результатов.

Иммунохимический анализ крови позволяет применять комплексы тестов, определяющих белки сыворотки в норме и патологии с учетом возрастных изменений.

Анализ крови иммунологический — метод, используемый специалистами в области медицины для определения возможности организма пациента сопротивляться серьезным бактериальным и вирусным заболеваниям. Результаты диагностики определяют уровень иммунной защиты, оценивая качественные и количественные показатели клеток и наличие антител в кровеносном русле.

Чужеродные агенты (вирусы, бактерии, грибы, химические и токсические вещества), которые попадают в организм человека, называются антигенами. Иммунная система реагирует на их вторжение активной выработкой так называемых антител — специфических образований на поверхности лимфоцитов, направленных на связывание с антигенами и их дальнейшей инактивацией.

Созревание, дифференциация и образование иммунных клеток происходят в следующих органах:

  • костный мозг, располагающийся в больших костях;
  • вилочковая железа;
  • миндалины;
  • лимфатические узлы.

Очищение крови от чужеродных агентов, связанных с клетками крови, происходит в селезенке. Лимфоциты транспортируются по организму и разносятся в разные области с током лимфы по лимфатическим сосудам. Это периферический отдел иммунной системы.

Анализ крови иммунологический назначается в следующих случаях:

  • часто повторяющиеся заболевания инфекционного генеза;
  • тяжело протекающая инфекционная болезнь;
  • иммунодефицит приобретенного или врожденного характера;
  • наличие аутоиммунного заболевания;
  • аллергические состояния;
  • необходимость проведения обширных серьезных оперативных вмешательств;
  • послеоперационные осложнения;
  • контроль результатов приема иммуномодуляторов в динамике;
  • анорексия;
  • интоксикации различного характера;
  • опухолевые процессы;
  • сахарный диабет;
  • развитие серьезных побочных эффектов на фоне приема медикаментов.

Показатели иммунограммы не расшифровывают работники лаборатории. Результаты обследования оценивает лечащий специалист.

Получение итоговых результатов анализа включает целый комплекс мероприятий, направленных на определение количественных и качественных показателей иммунных клеток — иммуноглобулинов. В большинстве случаев в направлении на анализ специалист указывает, какое звено в работе факторов защиты необходимо оценить.

Полная иммунограмма, цена которой находится в пределах 5-6 тысяч рублей, является довольно длительным и трудоемким скринингом, поэтому работники лаборатории определяют только те показатели, которые необходимы врачу.

Часто берут кровь на исследование следующих иммунологических факторов:

  1. Количественные показатели сывороточных иммуноглобулинов M, A, G, E.
  2. Компоненты комплементов С3, С4-2.
  3. Функциональную активность иммунных клеток.
  4. Фагоцитарный индекс.
  5. Пролиферативную активность лимфоцитов.
  6. Количественные показатели субпопуляций иммунных клеток.

Анализ на иммунограмму в первую очередь определяет уровень и показатели иммуноглобулинов. Наибольшее количество (около 75 %) занимают иммуноглобулины G. Именно они способны проникать через плацентарный барьер из организма матери в организм плода, создавая собственную защитную систему малыша.

Если анализ крови иммунологический показывает недостаточное количество IgG, это может говорить о наличии опухоли лимфатической системы злокачественного характера или об отставании человека в развитии. Высокий уровень свидетельствует о патологии печени, аутоиммунном или инфекционном заболевании.

IgM занимает десятую часть от всех остальных иммуноглобулинов. Они появляются на начальных стадия развития болезни. IgM включают ревматоидные факторы и противоинфекционные иммуноглобулины. Высокие показатели говорят о развитии цирроза или гепатита.

IgA составляют 15 % от общей массы иммуноглобулинов. Они являются факторами защиты слизистых оболочек. Анализ крови иммунологический показывает повышенный уровень при развитии красной волчанки, ревматоидного артрита, миеломы, алкогольного отравления.

В течение первых 14 дней болезни появляются IgA. На протяжении еще 7 дней к их количеству присоединяются IgM. К концу месяца от начала развития заболевания в крови можно определить антитела класса А, М и G. Пока пациент идет на поправку, IgA и IgG остаются в кровеносной системе, но их количественные показатели снижаются в 2-4 раза.

Существуют также IgE и IgD. Эти антитела появляются при аллергических проявлениях и глистных инвазиях. У здорового человека они имеют низкие показатели.

Это специфические антитела, появляющиеся в организме к антигенам эритроцитов. Их выработка может быть вызвана резус-конфликтной беременностью или переливанием крови. В основе лежит распознавание резус-фактора донорской крови как чужеродного.

Анализ назначается в следующих случаях:

  • период вынашивания ребенка для профилактики резус-конфликта;
  • наблюдение за теми беременными, которые имеют отрицательный резус-фактор;
  • невынашивание беременности в анамнезе;
  • развитие гемолитической болезни новорожденного;
  • обследование пациента перед переливанием крови.

Иммунограмма, цена которой говорит об использовании качественных инновационных методов диагностики, позволяет оценить наличие антиспермальных антител в крови. Этот способ используется в качестве дополнительной диагностики бесплодия супружеских пар.

Антитела могут обнаруживать не только в крови, но и в слизи цервикального канала, на поверхности сперматозоидов, в плазме семенной жидкости. Сомнительные показатели находятся в пределах 55-60 Ед./мл. При получении таких результатов повторные обследования проводят через 14 дней.

Различают первичные и вторичные иммунодефицитные состояния. Первичные — врожденные, являющиеся результатом патологии на генном уровне. Вторичные — приобретенные, которые развиваются в течение жизни под действием различных физических и биологических факторов.

Также существуют физиологические иммунодефициты, возникающие на определенных этапах развития организма:

  • иммунодефицит новорожденного — обусловлен переходом от наличия материнских иммуноглобулинов в крови до выработки собственных;
  • иммунодефицит беременных — возникает на фоне действия плацентарных стероидов на активность комплементов;
  • старческий иммунодефицит — объясняется снижением интенсивности выработки защитных клеток, уменьшением фагоцитарной активности нейтрофилов, макрофагов, бактерицидной активности сыворотки.

Для восстановления работы иммунной системы при развитии патологических недостаточностей используют принципы коррекции:

  1. Инженерия иммунного характера — трансплантация костного мозга, печени, вилочковой железы, введение иммуноглобулинов, гемосорбция, иммуносорбция.
  2. Введение гормонов и медиаторов — интерферон, интерлейкин, гормональные факторы тимуса.
  3. Медикаментозное лечение.

Биохимические исследования требуют взятия утренней венозной крови (натощак до 12:00). За сутки до забора материала необходимо отказаться от спиртных напитков, табакокурения, ограничить физические нагрузки. Утром перед походом в лабораторию можно пить только воду.

В день сдачи крови не принимать никакие медикаменты. Если такой возможности нет, то сообщить о данном факторе работникам лаборатории, чтоб оценка результатов не была ошибочной. Биохимические исследования проводятся до любых диагностических и лечебных процедур.

Иммунологический анализ крови, расшифровка которого проводится врачом-иммунологом или лечащим специалистом, имеет следующие преимущества:

  • возможность получения точных результатов;
  • определение заболевания на ранних стадиях развития;
  • проведение коррекции медикаментозной терапии после определения соотношения показателей иммунной защиты;
  • помощь при затруднении постановки диагноза.

Недостатком является долгий процесс диагностики при необходимости оценки полной картины, поскольку иммунных факторов, требующих пересчета количественных показателей, огромное количество.

Иммунограмма является достоверным и точным анализом. Ее проведение требует высокой квалификации врачей-лаборантов. Расшифровка позволит определить состояние защитных сил организма, подтвердить или опровергнуть диагноз, подобрать эффективную схему лечения и повысить сопротивляемость к заболеваниям инфекционного характера.

Иммунохимический анализ крови основывается на специфическом связывании соединения, которое необходимо выявить, посредством соответствующих антител.

Если пара не может зачать ребенка или только его планирует и хочет предотвратить возникновение проблем, гинеколог и андролог направит обоих партнеров на анализ крови для определения уровня гормонов.

Расшифровка результатов исследования даст возможность понять, где скрывается проблема и каким образом ее можно устранить.

Врачей интересует расшифровка на уровень многих гормонов. В каждом случае перечень может разниться в зависимости от особенностей здоровья пары. Давайте рассмотрим некоторые гормоны, уровень которых может заинтересовать врача.

Лютеинизирующий гормон или лютеотропин (лютропин). Его «производство» сосредоточено в передней доле гипофиза и им занимаются гонадотропные клетки. Они влияют на развитие и работу половых желез.

У женщин этот гормон помогает поддерживать менструальный цикл и стимулировать выработку прогестерона и эстрогенов. У мужчин – отвечает за секрецию тестостерона.

Если расшифровка анализа крови показала повышение уровня лютропина, есть повод предположить наличие первичной дисфункции половых желез, синдрома поликистозных яичников, постменопаузу, а в некоторых случаях и аденому гипофиза.

ФГС (фолликулостимулирующий гормон) вырабатывается передней долей гипофиза, отвечает за стимуляцию роста фолликулов и поддержание менструального цикла. У мужчин стимулирует выработку спермы. Во время беременности уровень ФГС резко снижается и может не определяться. Это покажет расшифровка анализа крови.

Если ФГС повышен, вероятно, угнетение функции половых желез, алкоголизм, наличие опухолей. При пониженном уровне этого гормона можно предположить нарушения в работе ЦНС, поликистоз яичников, беременность, прием гормональных контрацептивов и пр.

Пролактин также вырабатывается в передней доле гипофиза. Основная задача этого гормона запуск процесса лактации и его поддержание. Максимальная выработка этого гормона припадает на период ночного сна.

Начиная с 8-й недели беременности, уровень пролактина повышается и достигает максимума к концу третьего триместра. Чрезмерная секреция пролактина ослабляет работу половых желез как у мужчин, так и у женщин.

Эстрадиол свободный (Е 3) и эстрадиол общий (Е 2) используют для мониторинга беременности. На протяжении всего этого периода уровень данного гормона повышается.

Если имеет место резкое снижение уровня эстрадиола или его уровень понижен, это может быть сигналом патологического состоянии плода.

По уровню этого гормона во время проведения пренатальной диагностики проверяют риск развития синдрома Дауна.

Наиболее простой и информативный — УЗИ. Одним из наименее опасных инвазивных методов является амниоцентез. Но он позволяет дать наиболее развернутый ответ о состоянии плода.

Прогестерон (П) продуцируется яичниками и корой надпочечников, а у мужчин – семенниками. Это промежуточный гормон в синтезе андрогенов. Максимальная его выработка припадает на 5-7-й день после овуляции.

Если оплодотворение не наступило, его уровень снижается, а если наступило, соответственно, повышается.

Основное диагностическое значение определения уровня данного гормона заключается в обнаружении овуляции и оценке работы желтого тела.

Также врач может написать направление на сдачу анализа крови на определение уровня: тестостерона (Т), антимюллерова гормона (АМГ), хорионического гонадотропина (ХГЧ) и пр.

Чтобы подтвердить или опровергнуть вероятную патологию, врач порекомендует понаблюдать за гормоном в динамике, для этого поможет полная расшифровка. Для этого снова нужно будет сдать анализ крови.

Чтобы расшифровка показателей была максимально точной, кровь нужно сдавать в одно и то же время суток. Следует указать и день менструального цикла или срок беременности, так как это влияет на уровень гормона.

Накануне сдачи анализа важно не переутомиться, не пить алкогольные напитки и не кушать жирную пищу. За час до забора крови следует воздержаться от курения.

Иммунохимические исследования на сегодняшний день признаны одним из самых точных и результативных методов лабораторной диагностики, поскольку он обладает высокой точностью.

  • диагностировать диабет,
  • диагностировать анемию,
  • диагностировать инфекционные заболевания,
  • оценивать функцию репродуктивной системы,
  • определять онкомаркеры,
  • проводить лекарственный мониторинг,
  • определять цитокины.
  • подозрение на наследственные отклонения, связанные с нарушением иммунных функций организма;
  • злокачественные опухоли;
  • патологии аллергической и аутоиммунной природы;
  • частые инфекционные заболевания (включая хронические);
  • комплексное обследование перед операцией по пересадке органов и после нее;
  • оценка эффективности назначенного лечения при всех вышеперечисленных состояниях.

Эти исследования крови позволяют комплексно оценить состояние защитных функций человеческого организма, поскольку оно наглядно показывает количество и все свойства иммунных клеток. Иммунохимический анализ также позволяет анализировать присутствие в крови тех или иных антител. Одним словом, иммунограмма — это целостная картина состояния иммунитета человека.

ИФА-исследование крови необходимо для выявления присутствия или отсутствие антител. Это высокоинформативный метод ранней диагностики различных инфекций.

Иммуноэлектрофоретический анализ уропротеинов помогает изучить качественный состав белков мочи, что важно для дифференциальной диагностики гломерулонефрита и пиелонефрита.

Анализы на гормоны репродуктивной сферы очень важны для диагностики и лечении многих заболеваний.

Что может входить в этот анализ? Перечислим основные составляющие:

  • Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ)
  • Лютенизирующий гормон (ЛГ)
  • Пролактин
  • Эстрадиол свободный (Е3)
  • Эстрадиол общий (Е2)
  • Прогестерон
  • Тестостерон
  • 17-гидроксипрогестерон (17-ОН-Р)
  • Тестостерон свободный
  • Дегидроэпиандростерон-сульфат (ДГЭА-С)
  • Дигидротестостерон (ДГТ)
  • Анти-мюллеров гормон (АМГ)
  • Андростендион
  • Глобулин, связывающий половые гормоны (ГСПГ)
  • Андростендиол глюкуронид
  • Ассоциированный с беременностью плазменный протеин A (PAPP-A)
  • Плацентарный лактоген (ПЛ)
  • Свободная ?-субъединица ХГЧ (свободный ?-ХГЧ)
  • Хорионический гонадотропин человека (ХГЧ)

Где можно пройти диагностику всего организма? Где можно сдать анализы в Москве? ответ очевиден — в клинике Neo Vita в Крылатском.

У нас вы можете не только пройти медицинское обследование, но и сделать диагностику психосоматического баланса организма — 4D диагностику здоровья.

В нашем отделении диагностики вы можете сдать анализы платно, пройти ультразвуковую диагностику, записаться на консультацию к неврологу.

  • 1 Иммунохимические методы анализа в клинической лаборатории
  • 2 Иммунохимические методы исследований Иммунохимические методы исследований – методы, основанные на специфической реакции взаимодействия антигена с антителом. Cфера применения — показаны в ситуациях, когда необходимо количественно определить концентрации химических веществ, содержащихся в очень низких концентрациях в биологическом материале. Белки сыворотки крови: Иммуноглобулины, липопротеины Опухолевые маркёры: Раково-эмбриональный антиген (РЭА), альфа-фетопротеин и др. Гормоны Инфекционные маркёры: Нbs Ag,Anti-HIV Маркеры воспаления: Ревматоидный Фактор, С- Реактивный Белок Лекарственные вещества: Теофиллин, Дигоксин, Фенитоин и др.
  • 3 Специфичность и чувствительность иммунохимических методов Специфичность: иммунохимические методы высокоспецифичны (95-98%), можно легко и точно дифференцировать в биологической пробе химические вещества, имеющие очень схожую молекулярную структуру (например, Тироксин и Трийодтиронин). Чувствительность: При помощи иммунологических методов исследования в биологической пробе можно определить химические вещества в концентрациях вплоть до моль/л
  • 4 Принцип иммунологических методов исследования Основа технологии любого иммунологического метода исследования – реакция между антигеном и антителом. Антиген — вещество, распознающееся иммунной системой Антитела (иммуноглобулины) — белки, специфически реагирующие с Аг. Антиген подходит к определенному антителу как «ключ к замку».
  • 5 Общая схема строения иммуноглобулинов
  • 6 Схема взаимодействия антигена с комплементарным ему антителом
  • 7 Перекрестное взаимодействие. Связывание вещества, структура которого очень схожа со структурой антигена, с соответствующим антителом называется перекрёстной реакцией Связывающее сродство в перекрестных реакциях как правило более низкое чем в процессе реагирования между абсолютно специфичными партнёрами.
  • 8 Методы иммунохимического тестирования Ag + At = Комплекс AgAt. 1.Детекция антигена — тест-система должна иметь в своём составе соответствующее антитело (для определения концентрации дигоксина надо иметь в тест- системе антитела к нему) 2.Детекция антител — тест-система должна содержать в своём составе соответствующий антиген (для определении антител к НbSAg в тест системе должен содержаться синтетический HbSAg) 3.Детекция иммунного комплекса (т.е. связанных между собой Антигена и Антитела) – реакция преципитации, агглютинации и т.д. ( в зависимости от молекулярной массы и концентрации в сыворотке крови исследуемого антигена
  • 9 Антитела, применяемые в иммунохимических тест-системах 1.Моноклональные антитела — полученные от одной клеточной линии ( клона), синтезируются клетками гибридомы. Такие Ат при взаимодействии со специфическим антигеном обладают одинаковой специфичностью и связывающей способностью. 2.Поликлональные антитела — смесь антител, полученных от различных клеточных линий. Получают из сыворотки иммунизированных животных. Антитела в такой смеси могут различаться по связывающей способности.
  • 10 Иммунохимические методы – основные технологические подходы Не предусматривается использование «твёрдой фазы» Отсутствуют процедуры разделения между несколькими реакционными стадиями Выполняются относительно быстро. Гомогенные иммунохимические методы
  • 11 Иммунохимические методы — основные технологические подходы (продолжение) Устраняется влияние на процесс исследования других компонентов, содержащихся в исследуемой пробе. Чувствительность выше.
  • 12 Основные виды гетерогенного иммунохимического анализа 1.Конкурентные методы 2.Сэндвич-методы
  • 13 Иммунохимические методы — основные технологические подходы (продолжение) 3.Иммунохимические методы на основе диффузии и электрофореза Растворённый АГ + растворённое АТ (в жидкостях или в гелях) преципитат (АГ+АТ) детекция визуально, либо при помощи измерительной аппаратуры. Необходима точность в соотношении концентраций между антигенами и антителами. Пассивная иммунодифузия антигена и антитела может быть активизированна при помощи различных электрофоретических методик.
  • 14 Изменение свойств преципитата в зависимости от соотношения АГ:АТ

Наиболее часто на практике используются три варианта твердофазного иммуноанализа — непрямой иммуноанализ, прямой иммуноанализ и иммуноанализ сэндвич-типа. Различия между этими типами иммуноанализа заключаются в следующем. В непрямом варианте иммуноанализа на первой стадии на поверхность лунок полистирольного планшета сорбируется антиген.

После удаления несвязавшихся молекул антигена добавляется образец, содержащий специфичные к данному антигену антитела. Образовавшиеся комплексы антиген-антитело детектируются с помощью анти-видовых антител, конъюгированных с какой-либо меткой (Рис. 1А).

В прямом варианте иммунанализа детекция сорбированного антигена осуществляется непосредственно с помощью специфичных антител, конъюгированных с меткой (Рис. 1Б). В иммуноанализе сэндвич-типа на первой стадии на поверхность планшета сорбируется не антиген, а антитела, специфичные к исследуемому антигену (антитела подложки).

После удаления не связавшихся молекул антител добавляется образец, содержащий антиген. Для детекции образовавшегося комплекса антитела подложки-антиген добавляются вторые антитела, специфичные к другому, пространственно удаленному, эпитопу антигена, конъюгированные с какой-либо меткой (Рис. 1В).

Использование в иммуноанализе сэндвич-типа антител, специфичных к двум различным эпитопам антигена, позволяет добиться высокой чувствительности и специфичности при определении антигена даже в таких гетерогенных образцах, как плазма крови.

Рис. 1. Принцип непрямого (А), прямого (Б) и иммуноанализа сэндвич-типа (В)

Метод непрямого иммуноанализа характеризуется осуществлением 3-х стадийного процесса, на первой стадии которого антиген адсорбируется на специально подготовленном пластике, на второй с антигеном взаимодействуют специфичные к нему антитела, а на третьей в систему вводят антивидовые антитела, конъюгированные с ферментом, обуславливающим проведение индикаторной ферментативной реакции. В данной методике в качестве фермента используют пероксидазу хрена. Реакция проводится в специальных 96-луночных планшетах.

В лунки 96-луночного планшета для проведения иммуноанализа сорбируют антиген 0,1-0,5 мкг в лунку в 100 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS). Инкубация проводится в течение 30 минут при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка (2-х кратная) несвязавшихся молекул антигена осуществляется фосфатно-солевым буфером содержащим 0.1% Tween-20 (PBSТ).

Для блокирования мест неспецифического связывания лунки планшета заполняют PBST и инкубируют в течение 10-15 минут при комнатной температуре.

Раститровку можно проводить как по горизонтальным, так и по вертикальным рядам планшета. Необходимо отметить, что раститровка антител проводится в том случае, если необходимо подобрать оптимальную концентрацию антител или определить титр. В том случае, если оптимальная концентрация и/или титр антител определены, то используют рекомендованное для данных конкретных антител разведение.

При раститровке в первую лунку ряда вносят готовое разведение антител — в среднем 1-10 мкг в лунку, далее проводят последовательное разведение антител в лунках. Инкубацию со специфичными антителами проводят в течение 30 минут при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка осуществляется с помощью PBSТ 3 раза.

В качестве детекторных (вторичных) антител используются антивидовые поликлональные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена. Чаще всего используются козьи или кроличьи антитела, специфичные к целой молекуле или к Fc-фрагментам специфичных антител.

Концентрация детекторных антител как правило указывается производителем в виде разведения исходного раствора (например, 1:1000). Инкубация со вторичными антителами проводится в течение 30 минут при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов.

Отмывка осуществляется с помощью PBSТ 5-6 раз.

Пероксидаза хрена катализирует реакцию окисления субстрата перекисью водорода. В качестве субстрата пероксидазы хрена используется о-фенилендиамин (ОФД). В результате прохождения реакции образуется окрашенный продукт окисления ОФД.

Раствор субстрата: К 10 мл субстратного буфера (0,1 М Na-цитратный буфер, рН 4,5) добавить 0,01 мл 30% перекиси водорода и 0,2 мл 50х раствора ОФД (340 мг ОФД в 10 мл этилового спирта; хранить при –20°С).

Инкубация проводится в течение 10 минут при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов.

Перед измерением оптической плотности проводят остановку цветной реакции с помощью 0,5 М H2SO4. В лунки с рабочим раствором ОФД после инкубации вносят по 50 мкл раствора 0,5 М серной кислоты. После этого можно сразу приступать к измерению оптической плотности.

Оптическая плотность раствора окрашенного продукта измеряется при λ=490 нм с использованием планшетного спектрофотометра.

Методика прямого иммуноанализа имеет лишь небольшие отличия по сравнению с методикой непрямого иммуноанализа. Так, стадии I и II одинаковы в обоих типах анализа.

Отличие заключается в том, что в прямом варианте иммуноанализа на стадии III используют специфичные антитела, конъюгированные с ферментной меткой.

При необходимости также можно проводить раститровку специфичных антител, конъюгированных с ферментной меткой, аналогично описанному ранее для неконъюгированных антител. Стадия IV опускается, а дальнейшие стадии (V-VII) проводятся аналогично описанному выше для непрямого варианта иммуноанализа.

Рис. 2. Схематическое изображение иммуноанализа «сэндвич»-типа. АТп — антитело подложки, АТд — детекторное антитело, АГ — антиген, М — метка, ковалентно связанная с детекторным антителом, П — подложка, на которую сорбируется антитело подложки.

В данном варианте иммуноанализа (Рис.2) используется пара антител, специфичных к пространственно удаленным эпитопам исследуемого антигена.

В лунки 96-луночного планшета для проведения иммуноанализа сорбируют антитела подложки 1-2 мкг в лунку в 100 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS).

Инкубация проводится в течение 30 минут при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов.

Отмывка (2-х кратная) несвязавшихся молекул антигена осуществляется фосфатно-солевым буфером содержащим 0,1% Tween-20 (PBSТ).

Для блокирования мест неспецифичного связывания лунки планшета заполняют PBST и инкубируют в течение 10-15 минут при комнатной температуре.

В лунки планшета с преадсорбироваными антителами вносят по 50 мкл исследуемого раствора либо стандартных разведений антигена.

Разведения антигена должны быть приготовлены на основе PBST, поскольку Tween-20 снижает неспецифичное связывание белковых молекул друг с другом и с поверхностью планшета.

И исследуемый раствор, и стандартные разведения антигена вносят попарно (либо по 3 повторности), используя по две (три) лунки на каждое разведение белка. Инкубацию проводят при комнатной температуре в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Отмывка осуществляется раствором PBST 3 раза.

В лунки планшета вносят по 100 мкл раствора специфичных антител, конъюгированных с ферментной меткой.

Оптимальная концентрация конъюгированных антител как правило указывается производителем (обычно используют концентрацию 2-4 мкг/мл).

Инкубация с антителами, содержащими ферментную метку, проводится в течение 30 минут при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка осуществляется с помощью PBSТ 5-6 раз.

В лунки вносят по 100 мкл раствора субстрата и инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре и постоянном перемешивании.

Перед измерением оптической плотности проводят остановку цветной реакции с помощью 0,5 М H2SO4. В лунки с рабочим раствором ОФД после инкубации вносят по 50 мкл раствора 0,5 М серной кислоты. После этого можно сразу приступать к измерению оптической плотности.

Оптическая плотность раствора окрашенного продукта измеряется при λ=490 нм с использованием планшетного спектрофотометра.

источник



Источник: domofoniya.com


Добавить комментарий